چکیده
دستورزی کشتهای سلولی با الیسیتورها یکی از استراتژیهای مهم جهت القای متابولیتهای
ارزشمند در بیوتکنولوژی گیاهی است. بدین منظور در این مطالعه اثر امواج US و تنش شوری بر
رشد، تولید متابولیتهای اولیه و ثانویه در کشت سلولی ریزجلبک Dunaliella salina مورد بررسی
قرار گرفت . کشتهای سلولی تحت اثر تیمارهای امواج US 5 و 04 ،2/ 04 کیلو هرتز( به مدت زمان 5 (
دقیقه و شوری با غلظت های 2 مولار و 3 مولار کلرید سدیم در قالب طرح کاملاً تصادفی و با سه
تکرار قرار گرفت. پارامترهای مورد اندازه گیری عبارت بودند از؛ رشد سلولی، محتوای پروتئین کل،
رنگیزههای فتوسنتزی )کلروفیل a و b ، کلروفیل کل و کاروتنوئیدها(، پتانسیل آنتی اکسیدانی، میزان
پراکسیداسیون لیپیدهای غشایی، مقدار ترکیبات فنلی، فلاونوئیدها، آنتوسیانینها، قندهای محلول،
بتاکاروتن و گلیسرول. نتایج نشان داد که با افزایش مدت زمان تابش امواج US و غلظت شوری
تعداد سلولها، مقدار رنگیزههای فتوسنتزی کاهش یافت. در مقابل پروتئین کل، پتانسیل آنتی
اکسیدانی، میزان پراکسیداسیون لیپیدهای غشایی، مقدار ترکیبات فنلی، فلاونوئیدها، آنتوسیانینها،
بتاکاروتن و گلیسرول افزایش یافت. بیشترین میزان بتاکاروتن در حالت تیمار انفرادی، در زمان 04
دقیقه تابش امواج US 00 و /9 ،02/ ، شوری 3 مولار و در تیمار تلفیقی آن دو، به ترتیب با مقادیر 3
00/8 میلی گرم در لیتر اندازه گیری شد. همچنین بیشترین میزان گلیسرول در شوری 3 مولار، 04
دقیقه تابش امواج US 01 میلی گرم در لیتر اندازه / 03 و 48 /5 ،00/ و تیمار تلفیقی آن دو به ترتیب 7
گیری شد. بنظر میرسد امواج US و شوری با تحریک سلولها و القای پاسخهای دفاعی و متابولیسم
ثانویه، باعث افزایش مقدار بتاکاروتن و گلیسرول در سلول ها گردید.
کلمات کلیدی: D. salina ، کشت سلولی، امواج US ، شوری، بتاکاروتن، گلیسرول
مقدمه
طبق برآوردهای صورت گرفته در سالهای اخیر، ارزش جهانی متابولیتهای ثانویه مشتق شده از
گیاهان و جلبکها رشد قابل توجهی داشته است. اما به دلایل گوناگونی همچون کمبود فضای کافی
برای رشد و نبود همیشگی شرایط رشد مناسب برای آنها واز طرفی ارزش بالای اقتصادی و ارزش
افزوده بالای متابولیتهای ثانویه که در زمینههای دارویی، تغذیهای، سوخت و کود دارند،
دانشمندان به فکر گزینهای جایگزین برای گیاهان برآمدند که با محدوده فضایی کم و شرایط
نامناسب محیطی نیز بتوانند همان اثرات مفید استخراجی از گیاهان را بدست آورند.
در پی تحقیقات متوالی و بررسی شرایط زندگی انسانهایی که به کمک آموزههای اجدادی از
جلبکها در تغذیهی خود استفاده میکردند مشاهده شد که میزان سرطانها و بیماریهای پوستی در
بین انسانها کمتر بود و کیفیت محصولات دامی آنها نیز بسیار بالاتر از حد عادی بود، بنابراین
توجه دانشمندان به تغذیه این گروه معطوف شد و در پی آن با مطالعه دقیقتر جلبکها دری به
سوی علمی جدید، گشوده شد.
جلبکها گروه بزرگی از موجودات هستند که از دو جنبه اقتصادی و اکولوژیکی دارای اهمیت زیادی
می باشند. از نظر اکولوژیکی؛ جلبکها در پایه هرم انرژی اکوسیستمهای عظیم آبی بوده و بعنوان
تولید کنندگان اصلی زنجیره غذایی، تثبیت کنندگان ازت و ایجاد اکوسیستم خاص و تامین غذای
آبزیان اهمیت دارند. از جنبه اقتصادی، این جلبکها در تهیه علوفه، کود و تولید بسیاری از پلی
ساکاریدهای با ارزش نظیر آگار، کاراژینان 0 و آلژیناتها 2 حائز اهمیت بوده و مصارف مستقیم این
فرمت پایان نامه pdf
تعداد صفحات 113
فهرست مطالب
عنوان صفحه
مقدمه
مقدمه
فصل اول:کلیات
جلبک -
رده بندی جلبک دونالیلا
بوم شناسی
کشت
مواد مغذی مورد نیاز
منبع کربن
منبع نیتروژن - - - 27
فسفر - - - 27
منیزیم و کلسیم - - - 27
سدیم - - - 27
کلرید و سولفات - - - 27
آهن - - - 28
عناصر و ویتامینها - - - 28
دما - - 28
ترکیبات مهم موجود در جلبک
بتا کاروتن - - - - 28
گلیسرول -
متابولیتهای ثانویه
امواج فراصوت ) - US )
اثرات زیستی امواج فراصوت
نحوة اثر امواج - - US
امواج - - - US و کاویتاسیون
امواج - - US و سیستم آنتی اکسیدان
شوری و اثر آن بر سلول
فصل دوم : تاریخچه تحقیق
اثر امواج فراصوت بر تولید متابولیتها
اثرات شوری بر جلبک - D. salina
هدف تحقیق -
فصل سوم :مواد و روشها
استریل کردن
طرز تهیه محیط کشت مایع جانسون
تهیه نمونه ی جلبک -
شرایط رشد -
اعمال تیمارها -
اندازه گیری رشد و پارامترهای بیوشیمیایی -
3 رشد - -
کلروفیل و کاروتنوئید کل
- بتاکاروتن
گلیسرول 54
تهیه محلولهای اندازهگیری گلیسرول 50
ترکیبات فنلی 50
اندازهگیری پروتئین 52
پتانسیل آنتی اکسیدانی 52
تهیه محلولهای بلانک و کنترل 53
فلاونوئیدکل 53
قندهای محلول 53
آنتوسیانین کل 50
تعیین سطح پراکسیداسیون لیپیدهای غشائی 50
روش - تجزیه و تحلیل دادهها 55
فصل چهارم: نتایج 51
تجزیه واریانس 57
اثرات امواج فراصوت 53
رشد سلولها 59
پروتئین
کلروفیل
کلروفیل
کلروفیل کل
کاروتنوئید
میزان قندهای محلول
MDA )تمامیت غشاء سلولها(
پتانسیل آنتی - - اکسیدانی
ترکیبات فنلی برون سلولی
ترکیبات فنلی درون سلولی
میزان فلاونوئید در طول موج 274 نانومتر 74
میزان فلاونوئید در طول موج 344 نانومتر 70
میزان فلاونوئید در طول موج 334 نانومتر 72
میزان آنتوسیانین 73
بتا کاروتن 70
میزان گلیسرول 75
اثر شوری بر رشد و تولید متابولیت 76
تعداد سلول 77
پروتئین 77
کلروفیل - - a 78
کلرفیل - - b 78
کلروفیل کل 78
کاروتنوئید 78
قندهای محلول 79
تمامیت غشاء سلولها) - - MDA 79 )
درصد ترکیبات آنتی اکسیدانی 79
ترکیبات فنولی برون سلولی 84
ترکیبات سلولی درون سلولی 84
آنتوسیانین 84
فلاوونوئید 80
میزان بتا کاروتن 80
گلیسرول 80
اثر متقابل شوری و - US بر رشد و تولید متابولیت
رشد سلول 80
0 میزان پروتئین 80
کلروفیل - - b 85
کلروفیل - - a 85
کلروفیل کل 81
کاروتنوئید 81
فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری
رشد سلولها 90
پروتئین 97
کلروفیل 99
کاروتنوئید
قندها
درصد ترکیبات آنتی اکسیدانی
ترکیبات فنلی
آنتوسیانین
فلاونوئید
بتاکاروتن
گلیسرول
نتیجه گیری
پیشنهادات
منابع