مطالعه نقش استیله شدن بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی هورمون انسولین...

مطالعه نقش استیله شدن بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی هورمون انسولین... چکیده استیل سالیسیلیک اسید (آسپیرین) یکی از داروهای پرمصرف جهان است که به طور بالقوه توانایی انتقال گروه استیل موجود در ساختارش را به مولکول های واجد گروه آمین آزاد دارد.از آنجایی که فعالیت آمیلوئیدی هورمون انسولین بسیار حساس به تغییرات شیمیایی پس از ترجمه است در این پژوهش اثر استیلاسیون انسولین بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی آن بررسی می شود. برای این منظور انسولین در زمان های مختلف با آسپیرین به عنوان دهنده ی گروه استیل انکوبه گردید و در پایان میزان استیلاسیون این هورمون به کمک دو روش آزمون جذبی OPA و آزمون نشری فلورسامین تائید گردید. سپس به روش های مختلف اسپکتروسکوپی ( جذبی- فرابنفش، فلورسانس، دورنگ نمای دورانی، پراکنش پویای نور)، الکتروفورز ژلی و کشش سطحی ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی انسولین های استیله و غیراستیله مقایسه شد. نتایج این پژوهش وجود گونه های مولکولی با وزن بالا در نمونه های انسولین استیله را نشان می دهد. همچنین نتایج مطالعات دو رنگ نمای دورانی و طیف سنجی فلورسانس حاکی از تغییر قابل توجه ساختارهای دوم و سوم این هورمون ضمن فرآیند استیلاسیون است به نحوی که متاثر از این فرایند میزان سطوح آبگریز در معرض و محتوی ساختارهای بتای این پروتئین به میزان چشمگیری افزایش می یابد. علاوه بر این مشخص شد که استیلاسیون باعث افزایش کشش سطحی محلول انسولین می گردد. نتایج آزمون جذبی کنگورد، آزمون نشری تیوفلاوین T و مطالعات میکروسکوپی تمایل بالای انسولین استیله برای حضور در ساختارهای فیبری را نشان داد که البته فاقد سمیت سلولی بودند. همچنین در این پژوهش با استفاده از دو چاپرون آلفا کریستالین و بتا کازئین به طور موثری از فرآیند توده ای شدن انسولین استیله و غیراستیله در الگویی وابسته به غلظت جلوگیری شد. دلیل افزایش تمایل انسولین استیله برای حضور در ساختارهای توده ای و فیبر آمیلوئیدی را می توان با تغییرات ساختاری منحصر به فرد آن توجیه کرد. افزایش سطوح آبگریز در معرض همراه با افزایش محتوی صفحات بتا در ازدیاد تمایل انسولین استیله برای حضور درساختار های توده ای و فیبر آمیلوئید موثر می باشد. با توجه به نتایج این پژوهش به نظر می رسد علاوه بر عوارض جانبی آسپیرین مانند خونریزی دستگاه گوارش، پیامدهای ناشی از واکنش نامطلوب این ترکیب دارویی با پروتئین های مختلف از جمله انسولین را می توان به عواقب ناشی از مصرف بلند مدت این دارو افزود. واژگان کلیدی: آسپیرین، انسولین، استیلاسیون، ساختار، کشش سطحی، فیبر آمیلوئیدی فهرست مطالب عنوان صفحه فصل اول: مقدمه 1-1- هورمون انسولین 2 1-1- 1- ساختار هورمون انسولین 4 1-1-1-1- ساختار اول انسولین4 1-1-1-2- ساختار دوم انسولین5 1-1-1-3- ساختار سوم انسولین6 1-1-1-4- ساختار چهارم انسولین6 1-1-2- سنتز هورمون انسولین8 1-1-3- ترشح هورمون انسولین9 1-1-4- اشکال مختلف هورمون انسولین 10 1-1-5- عملکرد زیستی هورمون انسولین 11 1-1-6- گیرنده هورمون انسولین13 1-2- بیماری دیابت قندی15 1-2-1- دیابت نوع- 15 1-2-1-1- دیابت آدیوپاتیک16 1-2-2- دیابت نوع- II 16 1-2-3- دیابت حاملگی17 1-2-4- عوارض بیماری دیابت 17 عنوان صفحه 1-3- آسپرین ................................ 19 1-3-1- ساز و کار عملکرد آسپرین ............ 21 1-4- تا خوردگی و تجمعات پروتئینی............ 22 1-4-1- تجمعات منظم پروتئینی: فیبر آمیلوئیدی25 1-4-2- مراحل تشکیل فیبریل ها............... 26 1-4-3- پدیده فیبریلاسیون هورمون انسولین..... 28 1-5- نقش چاپرون ها در جلوگیری از فرآیند توده ای شدن و فیبریلاسیون پروتئین ها..................... 32 1-5-1- چاپرون های آلفا کریستالین و بتا کازئین 32 فصل دوم: مروری بر پژوهش های پیشین............. 35 فصل سوم: مواد و روش های تحقیق 3-1- مواد مصرفی و رده ی سلولی............... 40 3-1-1- مواد مصرفی.......................... 40 3-1-2- رده ی سلولی......................... 41 3-2- تهیه محلول ها.......................... 41 3-2-1- تهیه محلول های مورد نیاز کشت سلول سرطانی 41 3-2-1-1- تهیه محلول MTT.................. 41 3-2-1-2- تهیه محلول تریپان بلو جهت رنگ آمیزی و شمارش سلول های زنده و غیر زنده................ 41 3-2-1-3- تهیه محلول SDS-DMF............... 42 3-2-2- تهیه ی محلول های پروتئینی........... 42 عنوان صفحه 3-2-2-1- تهیه ی محلول انسولین ........... 42 3-2-2-2- تهیه محلول های بتاکازئین و آلفاکریستالین 43 3-2-3- تهیه ی محلول های مورد نیاز......... 43 3-2-3- 1- تهیه محلول بافر فسفات......... 43 3-2-3-2- تهیه ی محلول استوک ANS.......... 44 3-2-3-3- تهیه ی محلول استوک تیوفلاوین T . 45 3-2-3-4- تهیه محلول استوک کنگورد......... 46 3-2-3-5- تهیه محلول OPA................. 47 3-2-3-6- تهیه محلول فلورسامین........... 48 3-2-4- تهیه محلول های مورد نیاز ژل الکتروفورز 48 3-2-4-1- تهیه محلول آکریل آمید و بیس آکریل آمید48 3-2-4-2- تهیه محلول 20 درصد SDS......... 48 3-2-4-3- تهیه محلول 10 درصد آمونیوم پرسولفات (APS) 49 3-2-4-4- تهیه محلول بافر تریس 5/1 مولار .. 49 3-2-4-5- تهیه محلول بافر تریس 5/0 مولار . 49 3-2-4-6- تهیه محلول بافر تانک........... 50 3-2-4-7- تهیه بافر نمونه X2 ............ 50 3-2-4-8- تهیه محلول رنگ آمیزی کوماسی بلو51 3-2-4-9- تهیه محلول رنگ زدای کوماسی بلو.. 51 3-3- روش های استفاده شده در این پژوهش....... 52 3-3-1- تخلیص آلفا کریستالین .............. 52 3-4- روش های تحقیق.......................... 53 3-4-1- فرآیند استیلاسیون هورمون انسولین پانکراس گاوی با آسپیرین5 عنوان صفحه 3-4-2- الکتروفورز ژلی هورمون انسولین استیله و غیر استیله به منظور بررسی میزان استیلاسیون و تشکیل توده های پروتئینی با وزن مولکولی بالا........................ 53 3-4-3- تعیین گروه های آمین آزاد/ غیر واکنش دهنده در هورمون انسولین.................................... 54 3-4-4- مطالعه فلورسانس ذاتی هورمون انسولین در حضور آسپیرین........................................... 55 3-4-5- مطالعه فلورسانس عارضی هورمون انسولین در حضور آسپیرین........................................... 56 3-4-6- بررسی تشکیل فیبر آمیلوئیدی هورمون انسولین در حضور آسپیرین با استفاده از آزمون فلورسانس تیوفلاوین T (ThT) و آزمون اسپکتروسکوپی سنجش جذبی کنگورد............. 57 3-4-7- بررسی توده ای شدن پروتئین انسولین استیله و غیر استیله ........................................... 58 3-4-8- مطالعه اثر استرس های شیمیایی و فیزیکی در القاء تشکیل فیبر آمیلوئیدی انسولین استیله و غیر استیله58 3-4-9- مطالعه جلوگیری از توده ای شدن هورمون انسولین استیله و غیر استیله با چاپرون های بتا کازئین و آلفا کریستالین 59 3-4-10- مطالعه ساختار دوم انسولین به روش دو رنگ نمای دورانی در حضور آسپیرین .......................... 59 3-4-11- مطالعه هورمون انسولین به روش دستگاه پراکندگی پویای نور در حضورآسپیرین................... 61 3-4-12- مطالعه تغییرات کشش سطحی نمونه های انسولین استیله و غیر استیله............... 62 3-4-13- مشاهده ی فیبر آمیلوئیدی پروتئین با دستگاه میکروسکوپ فلورسانس......................... 63 3-4-14- بررسی فعالیت القا مرگ سلولی انسولین استیله با سنجش MTT........................................... 63 3-4-15- آزمون آماری........................ 65 عنوان صفحه فصل چهارم: نتایج و بحث 4-1- مطالعه استیلاسیون پروتئین انسولین پانکراس گاوی در حضور آسپیرین..................................... 67 4-2- مطالعه بررسی استیلاسیون پروتئین انسولین. 67 4-3- بررسی پیدایش گونه های مولکولی با وزن بالای انسولین در حضور آسپیرین با الکتروفورز ژلی........................... 70 4-4- مطالعه پیدایش گونه های مولکولی مختلف انسولین در حضور آسپیرین با روش پراکنش پویای نور.................... 73 4-5- مطالعه ساختار دوم پروتئین انسولین استیله به روش دو رنگ نمای دورانی...................................... 75 4-6- مطالعه ساختار سوم انسولین استیله با روش فلورسانس ذاتی و محیطی....................................... 78 4-7- مطالعه کشش سطحی انسولین نمونه های مختلف انسولینی 80 4-8- بررسی توده ای شدن پروتئین انسولین بعد از فرآیند استیلاسیون............................................ 82 4-9- بررسی تشکیل فیبر آمیلوئیدی پروتئین انسولین در حضور آسپیرین با روش های اسپکتروسکوپی.................... 84 4-10- مطالعه ی میکروسکوپی تشکیل فیبر آمیلوئیدی به وسیله ی پروتئین انسولین در حضور آسپیرین.................... 87 4-11- مطالعه ی اثر استرس های شیمیایی و فیزیکی بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی انسولین استیله و غیر استیله....... 88 4-12- مطالعه کینتیک توده ای شدن نمونه های مختلف انسولینی 93 4-13- جلوگیری از فرآیند توده ای شدن نمونه های مختلف انسولینی به کمک دو چاپرون مولکولی آلفا کریستالین و بتا کازئین 94 4-14- مطالعه ی سمیت توده های پروتئینی انسولین استیله 97 نتیجه گیری ................................... 99 فهرست منابع و مآخذ ........................... 101 فهرست جداول عنوان صفحه جدول3-1- مقادیر لازم برای تهیه ی 1 لیتر بافر فسفات 43 جدول3-2- مقادیر لازم برای تهیه ی 1 لیتر بافر تانک50 جدول 3-3- مقادیر مورد نیاز جهت تهیه ی 25 میلی لیتر بافر نمونه51 جدول 4-1- تغییرات شعاع هیدرودینامیک پروتئین انسولین در حضور آسپیرین....................................... 75 جدول 4-2- محتوای ساختارهای دوم نمونه های مختلف انسولین بر حسب درصد.............................................. 77 فهرست شکل ها عنوان صفحه شکل 1-1- توالی اسید آمینهی پروتئین انسولین انسانی 4 شکل 1-2- ساختار سوم و چهارم انسولین............ 7 شکل1-3- نمایی از مراحل سنتز هورمون انسولین..... 9 شکل 1-4- نمایی شماتیک از سلول بتای پانکراس و چگونگی ترشح انسولین از این سلول............. 10 شکل1-5- مدل ساختاری گیرنده انسولین............ 14 شکل1-6- نمایی از ساختار مولکولی داروی آسپیرین. 20 شکل1-7- نمایی از مراحل تاخوردگی پروتئین....... 23 شکل1-8- نمایی از ایجاد حالات مولکولی گوناگون در مسیر تاخوردگی پروتئین....................................... 25 شکل1-9- تصویر شماتیک الگوی پراش اشعه X ساختار های بتا در فیبرهای آمیلوئید...................................... 26 شکل1-10- کینتیک تشکیل فیبر آمیلوئیدی.......... 27 شکل 1-11- نمایی از ساز و کار فیبریلاسیون هورمون انسولین 28 شکل1-12- مدل سلسله مراتبی تجمع انسولین در تشکیل فیبر آمیلوئید31 شکل 3-1- نمایی از طیف جذبی انسولین............ 43 شکل3-2- نمایی از طیف جذبی ANS................ 44 شکل3-3- نمایی از طیف جذبی تیو فلاوین-T......... 45 شکل 3-4- نمایی از طیف جذبی کنگورد............. 46 شکل3-5- نمایی از ساختار ترکیبOPA............. 47 عنوان صفحه شکل3-6- نمایی از ساختار شیمیایی ترکیب فلورسامین48 شکل 3-7- دستگاه فلورسانس Cary-Eclips.............. 57 شکل 3-8- نمایی از دستگاه دورنگ نمای دورانی215 Aviv 60 شکل 3-9- نمایی از دستگاه DLS.................. 61 شکل3-10- دستگاه کشش سنج Kruss K100............... 62 شکل3-11- نمایی از دستگاه میکروسکوپ فلورسانس Olympus-CX31 63 شکل 3-12- نمایی از خانه های پلیت کشت سلولی.... 64 شکل 3-13- تبدیل MTTبه فورمازان در یک واکنش کاهشی در میتوکندری سلول های زنده.................... 65 شکل 4-1- نتایج حاصل از مطالعه ی استیلاسیون پروتئین انسولین با استفاده از آزمون های جذبیOPA و نشری فلورسامین69 شکل 4-2- نمایی از الکتروفورز طبیعی و غیر طبیعی (احیایی و غیر احیایی ) نمونه های مختلف هورمون انسولین................ 71 شکل 4-3- نمایی از الکتروفورز طبیعی و غیر طبیعی (احیایی و غیر احیایی ) نمونه های مختلف هورمون انسولین............... 72 شکل 4-4- مطالعه ی DLS نمونه های متفاوت انسولین74 شکل 4-5- طیف دو رنگ نمای دورانی محدوده فرابنفش دور نمونه های انسولین استیله شده در مدت زمان 20 روز و 36 روز76 شکل 4-6- طیف نشری فلورسانس ذاتی نمونه های مختلف انسولین 79 شکل 4-7- طیف نشری فلورسانس عارضی نمونه های مختلف انسولین80 شکل 4-8- مطالعه ی تغییرات کشش سطحی نمونه های متفاوت انسولین طی انکوباسیون در مدت زمان 20 و 36 روز......... 82 شکل 4-9- مطالعه ی توده ای شدن انسولین در حضور آسپیری83 عنوان صفحه شکل 4-10- مطالعه ی فلورسانس تیوفلاوین T نمونه های انکوبه شده 20 روز و 36 روز انسولین در حضور آسپیرین...... 85 شکل 4-11- مطالعه ی اتصال کنگورد به نمونه های مختلف انسولینی 86 شکل 4-12- تصویر فیبر آمیلوئیدی پروتئین انسولین مشاهده شده با فلورسانس تیوفلاوینT....................... 88 شکل 4-13- مطالعه ی نشر فلورسانس ذاتی نمونه های متفاوت انسولین در حضور استرس شیمیایی و فیزیکی............... 90 شکل4-14- مطالعه ی نشر فلورسانس عارضی نمونه های متفاوت انسولین در حضوراسترس شیمیایی و فیزیکی................ 91 شکل 4-15- مطالعه ی فلورسانس تیوفلاوین Tنمونه های متفاوت انسولین در حضور استرس شیمیایی و فیزیکی............... 92 شکل 4-16- مطالعه ی کنیتیک توده ای شدن نمونه های مختلف انسولینی.............................................. 94 شکل 4-17- مطالعه جلوگیری از فرآیند توده ای شدن نمونه های مختلف انسولین با استفاده از چاپرون های بتا کازئین و آلفا کریستالین96 شکل 4-18- نتایج حاصل از آزمون MTT پس از 24 ساعت انکوبه کردن رده سلول سرطانی Jurkat با فیبر نمونه های انسولینی استیله وغیراستیله.............................................. 9 فصل اول 1-1- هورمون انسولین مسیر پیچیده کشف انسولین که با یک مشاهده اتفاقی شروع شد، بیانگر موهبتی بزرگ و آزمایش های دقیق است که به وسیله آن بسیاری از هورمون­ها کشف شدند. نقطه آغاز ماجرا اصلا ارتباطی با انسولین نداشت. در سال 1989 اسکار مینکوفسکی[1] به همراه ژوزف فون مرینگ[2] به بررسی دخالت پانکراس سگ در هضم چربی پرداختند. قبل از انجام آزمایش های مربوط به هضم چربی، مینکوفسکی مشاهده کرد که میزان ادرار سگ به طور قابل توجهی افزایش پیدا کرده است و همچنین مقادیر بالایی از گلوکز در ادرار مشاهده می شود. آن­ها با این مشاهده به نقش کمبود عاملی از پانکراس در ایجاد دیابت پی بردند. مینکوفسکی تلاش های زیادی در تهیه عصاره ای از پانکراس کرد تا بتواند اثر دیابت را معکوس نماید ولی هیچ وقت به چنین موفقیتی دست نیافت. امروزه با پیشرفت علم مشخص شده که ماهیت پروتئینی انسولین از یک سو و تولید پروتئازها در پانکراس از سویی دیگر، از طریق تجزیه این هورمون به وسیله این آنزیم ها عامل این شکست بوده است. تلاش های بی ثمر زیادی در این راستا انجام شد که تا تابستان 1921 نتیجه ای در بر نداشت. در این سال دانشمندی به نام فریدریک بنتینگ[3] با همکاری چارلز بست[4] در آزمایشگاه مک لود[5] این موضوع را بررسی کردند. از این به بعد بود که سلول های جزایر لانگرهانس به عنوان محل اختصاصی تولید عامل ضد دیابت مشخص شد. بر همین اساس نام انسولین به دلیل اینکه در جزایر لانگرهانس تولید می شود بر روی عامل ضد دیابت گذاشته شد. بنتینگ و بست به همراه بیوشیمی دانی به نام کولیپ[6] موفق به تهیه عصاره ی خالصی از پانکراس شدند که سبب بهبود علایم ناشی از دیابت در سگ شد. یک سال بعد با تزریق فرآورده انسولین به پسر بچه 14 ساله ای به نام لئونارد تامپسون که مبتلا به دیابت قندی شدید بود، جان وی نجات یافت. در سال 1923 جایزه نوبل برای این کشف به بنتینگ و مک لود اهدا شد. تا سال های مدید برای تولید انسولین از پانکراس خوک استفاده می شد تا اینکه در دهه 1980 و با پیشرفت مهندسی ژنتیک از ژن های کلون شده انسانی در میکرو ارگانیسم ها برای این منظور استفاده شد. انسولین هورمونی است که برای تنظیم ذخیره ی انرژی و سوخت و ساز گلوکز در بدن ضروری است و درون بافت های کبدی، ماهیچه ای و چربی به عنوان یک عامل محرک برای دریافت گلوکز از خون و ذخیره ی آن به صورت گلیکوژن عمل می نماید. انسولین یکی از کوچکترین پروتئین هایی است که دارای ساختار های متنوع پروتئینی شامل مارپیچ آلفا[7]، صفحات بتا[8]، چرخش بتا[9]، خودتجمعی[10] و فیبرهای آمیلوئیدی[11] است (Huaو همکاران 2004، Dobson 1999 ). 1-1- 1- ساختار هورمون انسولین 1-1-1-1- ساختار اول انسولین انسولین که اولین هورمون پپتیدی کشف شده می باشد دارای 51 اسید آمینه در دو زنجیره ی پلی پپتیدیA و B است. ساختار طبیعی این هورمون به وسیله سه پلی دی سولفیدی پایدار می شود. در این پروتئین یک پیوند دی سولفیدی درون زنجیره ای بین اسید آمینه ی سیستئین 6 و 11 زنجیره ی A ، دو پیوند دی سولفیدی بین زنجیره ای میان اسید آمینه های سیستئین موقعیت 7 زنجیره A و موقعیت 7 زنجیره ی B، همچنین سیستئین جایگاه 20 از زنجیره A و سیستئین جایگاه 19 زنجیره ی B تشکیل می شود. (Nielsen و همکاران 2001) شکل 1-1- توالی اسید آمینهی پروتئین انسولین انسانی. ساختار اول انسولین در بین گونه های انسانی وحیوانی به صورت حفاظت شده است. جایگاه پیوند های دی سولفیدی و تعداد اسید های آمینه در هر زنجیره در اغلب گونه ها ثابت است. در بین گونه های مختلف، انسولین های انسانی، گاوی و خوکی دارای بیشترین شباهت هستند. درمقایسه با انسولین انسانی در گونه ی خوکی درموقعیت 30 زنجیره B اسید آمینه آلانین جایگزین اسید آمینه ترئونین شده است و در انسولین گاوی علاوه بر این تغییر در موقعیت A8 آلانین جانشین ترئونین و در موقعیت A10والین جایگزین ایزولوسین گردیده است. این تغییرات تاثیری بر روی فعالیت زیستی این هورمون ندارد. دیگر اسید های آمینه که بدون تغییر در بین گونه ها باقی مانده اند مسئول شکل گیری ساختار مولکول بوده و به تا خوردگی صحیح مولکول انسولین کمک می کنند. به عنوان مثل باقی مانده های اسید آمینه ی سیستئین، اسید آمینه های غیر قطبی که هسته آبگریز پروتئین را تشکیل می دهند و سایر باقی مانده های اسید آمینه ای که در تا خوردگی صحیح ساختار سوم این پروتئین نقش ایفا می کنند در پدیده های فوق الذکر اهمیت دارند (Brange و همکاران 1993). 1-1-1-2- ساختار دوم انسولین در ساختار دوم پروتئین ها زنجیره های پلی پپتیدی حالت منظم به خود می گیرندو به وسیله پیوند های هیدروژنی بین گروه های آمین و کربوکسیل زنجیره های جانبی پایدار می شود. این موتیف های ساختاری شامل مارپیچ آلفا، زنجیره های بتا، چرخش بتا و لوپ هستند. انسولین پروتئین کروی غنی از ساختار های ثانویه مارپیچ آلفا است. در این پروتئین سه مارپیچ آلفا A2-A8 , A13-A19 , B9-B19))، دو چرخش بتا (B7-B10 , B20-B23) و یک زنجیره بتا B24-B28)) دیده می شود. سه مارپیچ آلفا بدنه اصلی پروتئین انسولین را تشکیل می دهد. در این میان، مارپیچ آلفا A2-A8 به خوبی دو مارپیچ آلفا دیگرتا نمی خورد (Baker و همکاران 1998). به طور کلی چهار پخش هسته آبگریز انسولین را تشکیل می دهند: مارپیچ مرکزی زنجیره B، پل دی سولفیدی A20-B19)) مارپیچ آلفا انتهای کربوکسیل زنجیره AA13-A19)) و یک چرخش بتا B20-B23)) (Hua و همکاران 2001). روش معمول برای مطالعه ساختارهای دوم پروتئین استفاده از دستگاه دو رنگ نمای دورانی[12] در محدوده طول موج 250 تا 170 نانومتر است. مطالعه ساختاری انسولین با این روش نشان دهنده دو کمینه در طول موج های 208 و 222 نانومتر است که بیانگر ساختارهای مارپیچ آلفا می باشد. همچنین یک کمینه در طول موج 218 نانومتر نشانگر صفحات بتای شرکت کننده در ساختار این پروتئین است. 1-1-1-3- ساختار سوم انسولین ساختار سوم در واقع نحوه قرارگیری ساختار های دوم در کنار یکدیگر است. در این ساختار چهار نوع بر همکنش شامل پیوند هیدروژنی، پل نمکی، پیوند دی سولفیدی و برهمکنش های غیر قطبی آب گریز بین زنجیره های جانبی اسید آمینه ها وجود دارد. ساختار سوم بیشتر به وسیله ی پیوند دی سولفیدی پایدار می شود که این پیوند ها بین گروه های تیولی باقی مانده های اسید آمینه سیستئین صورت می گیرد. قابل ذکر است که سطح بیرونی مولکول انسولین قطبی است درحالی که سطح درونی آن بیشتر غیر قطبی می باشد. در آرایش ساختار سوم انسولین سیستئین های A6 و A11 و زنجیره های جانبی اسید های آمینه جایگاه های 6A و A16 و اسید های آمینه لوسین B11و B15 درون هسته غیر قطبی قرار می گیرند. همچنین 23 اسید آمینه قطبی این پروتئین در بخش های سطحی و در معرض حلال می باشند(Brange و همکاران 1993). 1-1-1-4- ساختار چهارم انسولین در ساختار چهارم پروتئین ها، دو یا بیش از دو زنجیره پلی پپتیدی در کنار یکدیگر قرار می گیرند. شاخه جانبی آمینواسیدی این زنجیره های پلی پپتیدی به وسیله ی برهمکنش های آبگزیر و واندروالس با هم تماس می یابند. در خصوص پروتئین انسولین به دلیل اینکه پیوندهای دی سولفیدی به جای برهمکنش های آبگزیر پایدارکننده و شکل دهنده ساختمان فضایی آن است، ساختار چهارم را حالات دیمر و هگزامر این پروتئین در نظر می گیرند که در آن مونومرها به دلیل برهمکنش های آبگزیر و هیدروژنی کنار یکدیگر قرار دارند. انسولین تنها درغلظت های پایین به صورت مونومر است ولی در غلظت های بالاتر از 01/0 میلی مولار (که غلظت به کار رفته در فرمولاسیون های دارویی است) به صورت دیمر دیده می شود. در محدود pH بین 4 تا 8 و در حضور یون روی هنگامی که غلظت انسولین بالاتر از 01/0 میلی مولار باشد سه دیمر انسولینی گرد هم آمده و یک ساختار هگزامری را تشکیل می دهند. در غلظت های بالاتر از 2 میلی مولار و در pH خنثی، حتی در غیاب یون روی انسولین به صورت هگزامر است. دو مولکول انسولین در یک دیمر به وسیله نیروهای آبگریز و چهار پیوند هیدروژنی (بین اتم های زنجیره اصلی متعلق به باقی مانده های B26-B24) کنار یکدیگر نگاه داشته شده اند. در مونومرهای انسولین این چهار پیوند هیدروژنی یک ساختار صفحه ی بتای موازی ناهمسو بین قطعات انتهای C زنجیره Bبه وجود می آورند. تجمع دیمر ها در اطراف یون روی باعث پوشیده شدن بخش های غیر قطبی ای می شود که در حالت مونومر در سطح هستند (B17, B18, B14, B1, B2 A13, A14). برهمکنش بین دیمرها در حالت هگزامری به میزان قابل ملاحظه ای سست تراز برهمکنش میان مونومر ها در دیمر است. زنجیره های A، بخش بزرگی از سطح عمدتاً قطبی هگزامر را در بر می گیرند. حالت هگزامر این پروتئین ساختاری تقریبا کروی شکل به قطر 50 آنگستروم و ارتفاع 35 آنگستروم است (Jansen و همکاران 2005 ،Jeffrey و همکاران1996). شکل 1-2- ساختار سوم و چهارم انسولین.(a شکل مونومر (b شکل دایمر (c شکل هگزامر. 1-1-2- سنتز هورمون انسولین انسولین به طور اختصاصی به وسیله ی سلول های بتای جزایر لانگرهانس پانکراس ساخته می شود. اولین محصول ترجمه ی ژن انسولین، پری پرو انسولین با 110 اسیدآمینه ای است و 24 اسیدآمینه آن مربوط به پپتید نشانه می باشد. این پپتید نشانه[13] با ذره ی شناساگر سیگنال[14] در سیتوزول بر همکنش می دهد. در مرحله ی بعد این کمپلکس از طریق گیرنده ی مربوطه وارد شبکه ی آندوپلاسمی می شود. با برش پروتئولیتیکی برروی پری پروانسولین در لومن شبکه ی آندوپلاسمی پرو انسولین تشکیل می شود. سپس در پروانسولین با تشکیل پیوندهای دی سولفیدی تا خوردگی مناسب ایجاد می شود. پروانسولین تا خورده به دستگاه گلژی منتقل می شود تا مراحل بعدی پردازش بر روی آن صورت گیرد. پروانسولین که توسط استینر[15] و همکاران کشف شد با حذف آنزیمی توالی اسید آمینه ای موسوم به پپتید C[16] در جایگاه های دو اسید آمینه بازی (آرژنین- آرژنین و آرژنین- لیزین ) تبدیل به انسولین می شود. در این پردازش آنزیمی موسوم به پروهورمون کانورتاز 3/1، پروهورمون کانورتاز 2 و کربوکسی پپتیداز E دخالت دارند. آنزیم های پروهورمون کانورتاز به صورت اختصاصی برش می دهند. پروهورمون کانورتاز 3/1 جایگاه اتصال بین زنجیره ی B و پپتید C را برش می دهد در حالی که پروهورمون کانورتاز2 مسئول برش ناحیه ی بین زنجیره ی A و پپتید C است. همچنین اسید های آمینه باقی مانده به وسیله ی آنزیم کربوکسی پپتیداز E حذف می شوند. در طی این پردازش سه مولکول آرژنین و یک مولکول لیزین آزاد می گردد (Masahiro و همکاران 2011). شکل1-3- نمایی از مراحل سنتز هورمون انسولین. 1-1-3- ترشح هورمون انسولین هورمون انسولین در پاسخ به محرک هایی چون گلوکز، آرژنین و سولفونیل اوره از سلول های بتای پانکراس ترشح می شود. البته محرک اصلی برای ترشح این هورمون گلوکز می باشد. گلوکز از طریق پروتئین انتقال دهنده ی غشایی GluT-2به درون سلول های بتای پانکراس وارد شده و به وسیله ی آنزیم گلوکوکیناز اکسایش می یابد. در محدوده غلظت پایین تر از mg/dl 90 گلوکز باز بودن کانال های پتاسیمی سبب ایجاد پتانسیل منفی در غشای سلول های بتا می شود که در این حالت کانال های ورود کلسیم به درون سلول بسته می باشد. با افزایش غلظت گلوکز پلاسما، دریافت سوخت وساز گلوکز به وسیله ی سلول های بتا افزایش می یابد که این پدیده موجب دپلاریزاسیون غشا و باز شدن کانال کلسیمی و افزایش غلظت درون سلولی کلسیم می شود. این پدیده در نهایت به اگزوسیتوز گرانول های انسولین منجر می گردد. از منظر ساختاری کانال های پتاسیمی وابسته به ATPدر پانکراس ازدو زیرواحد غیر مرتبط گیرنده سولفونیل اوره و زیرواحد کانال پتاسیم تشکیل شده است. شکل 1-4- نمایی شماتیک از سلول بتای پانکراس و چگونگی ترشح انسولین از این سلول. 1-1-4- اشکال مختلف هورمون انسولین ساختار بلوری انسولین برای اولین بار در سال 1926 توسط ابِل[17] گزارش شد. ده سال بعد اسکات[18] اهمیت یون روی را در ساختار بلور این پروتئین نشان داد (Scott 1934 ،Milthorpe و همکاران 1997) . انسولین در غلظت های کم به شکل مونومر می باشد و در غلظت های بالاتر و pH خنثی به صورت دیمر است. کمپلکس هگزامری انسولین در غلظت های بالا و در حضور یون روی ایجاد می شود. قابل ذکراست که شکل عملکردی انسولین در جریان خون به صورت مونومر و شکل ذخیره ای آن در سلول های بتای پانکراس به صورت هگزامر با دو یون روی می باشد. نیمه عمر هورمون انسولین در حالت مونومری 5 تا 10 دقیقه است. از آنجایی که این پروتئین در شکل هگزامری دارای نیمه عمر بالایی است به طور بالقوه می تواند متحمل تغییرات شیمیایی پس از ترجمه مانند قندی شدن غیرآنزیمی و استیلاسیون شود. 1-1-5- عملکرد زیستی هورمون انسولین انسولین نقش مهمی در تنظیم سوخت وساز مهره داران خصوصا سوخت وساز کربوهیدرات ها دارد. این پروتئین برای ایفای نقش هورمونی اش باید بطور صحیح به گیرنده ی غشایی اش وصل شود. اتصال انسولین به گیرنده غشایی سبب فعال سازی یکسری آنزیم های تیروزین کیناز و ایجاد دو اثر بلندمدت و کوتاه مدت می شود. در کوتاه مدت این هورمون باعث افزایش انتقال قند به درون سلول و افزایش سنتز پروتئین و مهار فرایند های هضم لیپیدی[19] می شود. فعال سازی و غیر فعال سازی یکسری آنزیم ها نظیر گلیکوژن سنتتاز و گلیکوژن فسفوریلاز از آثار کوتاه مدت این هورمون است. در بلندمدت این هورمون سبب فعال سازی آنزیم گلوکوکیناز می شود و همچنین برخی آنزیم­های مسیر گلوکونئوژنز را نیز مهار می کند. مطالعات زیادی بر روی جهش یافته های انسولین صورت گرفته است تا مشخص گردد که کدام باقیمانده های اسید آمینه ای در اتصال به گیرنده غشایی این هورمون مهم هستند. سه ناحیه حفاظت شده در ساختار انسولین در اتصال به گیرنده غشایی آن نقش برجسته ای دارند. این سه ناحیه شامل ناحیه ی انتهای N زنجیره ی A ( Gly1، Ile2، Val3، Glu4)، ناحیه ی انتهایی Cزنجیره ی A( Tyr19،Cys20،Asn21) و ناحیه انتهای C زنجیره ی B ( Gly23،Phe24، Phe25،Tyr26) می باشد. کلیه ی این باقیمانده های اسیدآمینه ای در سطح انسولین قرار می گیرند. بنابراین احتمال برهمکنش اینها با گیرنده­ی انسولین زیاد است. انواع جهش یافته انسولین انسانی که تمایل کمی برای اتصال به گیرنده ی این هورمون از خود نشان می دهند، در ایجاد تحمل گلوکز و هایپر انسولینمیا[20] مهم هستند. در این جهش یافته ها باقیمانده های اسید آمینه ای نواحی حفاظت شده با انواع دیگری جایگزین شده اند (Kwokو همکاران 1983، Pullen و همکاران 1976) جایگزینی های LeuB25 PheB25 ( انسولین شیکاگو)، SerB24 PheB24 ( انسولین لس آنجلس) و ValA3 LeuA3( انسولین واکایاما)، جهش هایی هستند که در سطح ژنی رخ می دهند و در نتیجه انسولینی ایجاد می شود که فقط 1 تا 5 درصد توانایی اتصال به گیرنده غشایی را دارد.-N استیلاسیون انتهای آمینی زنجیره ی A تا حدود 30 درصد اتصال این هورمون به گیرنده اش را کاهش می دهد. این پدیده بیانگر اهمیت بارهای مثبت گروه های آمین آزاد در این ناحیه است. حذف GlyA1 با کاهش 15 درصدی اتصال انسولین به گیرنده اش همراه است. با توجه به این مشاهدات گفته می شود که GlyA1 در اتصال صحیح انسولین به گیرنده این هورمون نقش دارد. این آمینواسید در تشکیل پل نمکی با انتهای کربوکسی زنجیره ی B نقش دارد (Wollmer و همکاران 1987، Nanjo و همکاران 1986، Blundell و همکاران 1972). اهمیت چهار اسیدآمینه ی انتهای کربوکسی زنجیره ی B( 26-23) در اتصال به گیرنده به وسیله ی انواع جهش یافته انسولینی شامل انسولین های شیکاگو و لس آنجلس مشخص شده است. مطالعات حذفی نشان می دهد که با حذف باقیمانده های اسیدآمینه ای انتهای کربوکسی زنجیره ی B (Tyr26،Thr27،Pro28،Lys29،Ala30) انسولینی موسوم به Despentapeptide (B26-B30) حاصل می شود. انسولین کوتاه شده تنها 20 درصد توانایی اتصال به گیرنده غشایی را دارد(1990 Tager، Riemanو همکاران 1983). 1-1-6- گیرنده هورمون انسولین گیرنده انسولین متعلق به خانواده تیروزین کینازی است که این خانواده در تمایز سلولی، رشد و سوخت وساز سلولی نقش مهمی ایفا می کند. گیرنده انسولین دارای خصوصیات فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی ویژه ای است که آن را از سایر اعضای این خانواده متمایز می کند. نقش فیزیولوژیکی اصلی این گیرنده در تنظیم متابولیکی است در حالی که سایر گیرنده­های تیروزین کیناز در تمایز و رشد سلول نقش دارند. نیمه عمر گیرنده ی هورمون انسولین حدود 7 ساعت می باشد. گیرنده­ی انسولین از دو نوع زیر واحد شامل دو زیر واحد آلفا و دو زیر واحد بتا تشکیل شده است که ساختار هتروتترامری ایجاد می کند. این دو زیرواحد با اتصال دی سولفیدی به یکدیگر وصل می باشد. این گیرنده در غشای پلاسمایی سلول های چربی، کبدی و ماهیچه اسکلتی قرار گرفته است. زیر واحد آلفا گیرنده انسولین با 720 اسیدآمینه در سطح سلول قرار دارد و جایگاه اتصال انسولین است. 620 اسیدآمینه ی زیر واحد بتای گیرنده انسولین سه ناحیه ی خارج سلولی، درون غشایی و سیتوزولی را تشکیل می دهد که وظیفه ی انتقال پیام به درون سلول را برعهده دارد. با اتصال انسولین به زیر واحد آلفا ساختار فضای گیرنده انسولین طوری تغییر می کند که این گیرنده در تیروزین های سیتوزولی زیر واحد بتا اتوفسفوریله می شود. در ادامه فسفوریلاسیون بر روی آنزیم های هدف صورت می گیرد و فعال سازی آن­ها در نهایت به بیان ژنی، رشد سلولی و سنتز چربی، پروتئین و گلیکوژن منجر می گردد(Ward و همکاران 2009 ، Lee و همکاران 1994). شکل1-5- مدل ساختاری گیرنده انسولین. هرگونه نقص و اختلال در سنتز، ترشح و عملکرد انسولین می تواند به یکسری علائم بالینی منجر گردد. دیابت یکی از اختلالات ناشی از نقص در سنتز و یا عملکرد انسولین می باشد. به طور طبیعی، بدن از گلوگز به عنوان انرژی استفاده می کند و برای مصرف گلوگز نیاز به انسولین است. در دیابت قندی یا بدن انسولین کافی تولید نمی کند و یا آنکه بدن از انسولین تولیدی بهره لازم را نمی برد و یا اینکه ترکیبی از هر دو اختلال به وجود می آید. وقتی گلوکز به مصرف سلول ها نرسد سطح آن در خون بالا می رود و در نهایت سبب آسیب به رگ های خونی، بافت های کبدی، قلبی، چشم ها و حتی سیستم عصبی می شود. 1-2- بیماری دیابت قندی بیماری دیابت به عنوان یکی از بیماری های شایعِ جهان امروز مطرح است. شیوع دیابت به دلیل افزایش جمعیت، چاقی و عدم تحرک فیزیکی ناشی از صنعتی شدن جوامع رو به افزایش است. مطابق پیش بینی سازمان بهداشت جهانی تعداد افراد دیابتی از 171 میلیون نفر در سال 2000 به 366 میلیون نفر در سال 2030 خواهد رسید. این بیماری شامل گروهی از عوارض متابولیکی است که مشخصه بارز آن بالا بودن گلوکز خون می باشد. بالا بودن قند خون منجر به علائمی نظیر تشنگی مفرط[21]، گرسنگی مفرط[22]، ادرار مکرر[23]، کاهش وزن و تاری دید می گردد. به طور کلی سه نوع اصلی دیابت قندی وجود دارد که شرح آنها در زیر آمده است. 1-2-1- دیابت نوع- I دیابت نوع- I 10 درصد افراد بیمار را شامل می شود. به دلیل نیاز به تزریق روزانه انسولین به آن دیابت وابسته به انسولین هم گفته می شود. این بیماری ناشی از نقص خودایمنی در سلول های بتای پانکراس می باشد. مارکر های ایمنی تخریب سلول های بتا شامل آنتی بادی علیه سلول های بتا، انسولین، گلوتامیک اسید دکربوکسیلاز و تیروزین فسفریلاز می باشد. آنتی بادی علیه یک یا چند مورد از موارد فوق در 85 تا 90 درصد افراد با قند خون ناشتا[24] دیده شده است. همچنین این بیماری ارتباط قوی با لوکوس ژنی آنتی ژن لکوسیت انسانی[25] دارد. سرعت تخریب سلول های بتا در افراد مختلف متفاوت است، در نوزادان و کودکان این پدیده سریع تر و در افراد بالغ با سرعت کمتری اتفاق می افتد. اگرچه عوامل متعدد ژنتیکی نقش برجسته ای در تخریب خودایمن سلول های بتا دارند ولی عوامل محیطی هم که هنوز به طور کامل شناخته نشده اند در بروز این اختلال موثرند. چاقی در افراد با این نوع بیماری دیده نمی شود البته وجود چاقی با این بیماری ناسازگار نیست. این بیماری افراد را برای ابتلا به اختلالات خودایمن دیگر مثل بیماری گریو[26]، بیماری ادیسون[27]، کم خونی کشنده[28] و کم کاری تیروئید هاشیموتو[29] مستعد می کند (2006 American Diabetes Association). 1-2-1-1- دیابت آدیوپاتیک[30] در برخی از افراد دیابتی نوع- I با وجود اینکه کاهش انسولین خون و کتواسیدوز[31] دارند اما هیچگونه شواهدی مبنی بر خود ایمنی در آنها دیده نمی شود. تعداد کمی از افراد دیابتی نوع- I در این گروه قرار می گیرند و اکثر افراد مبتلا نژاد آسیایی و آفریقایی دارند. در افراد با این نوع بیماری آنتی بادی علیه سلول های بتا دیده نمی شود و آنتی ژن لکوسیت انسانی در بروز آن نقشی ندارد. 1-2-2- دیابت نوع- II این شکل دیابت 90 درصد افراد بیمار را درگیر می کند و به آن دیابت غیروابسته به انسولین هم گفته می شود. مقاومت انسولینی و کمبود انسولین از علائم این بیماری است. افراد مبتلا به این بیماری عموما چاق هستند. در تحقیقات صورت گرفته ارتباط بین چاقی و مقاومت انسولینی دیده شده است. البته مقاومت انسولینی با کاهش وزن و درمان دارویی قندخون بالا بهبود می یابد. کتواسیدوز در این نوع دیابت به ندرت رخ می دهد و معمولا با بیماری های دیگری چون عفونت همراه می شود. این بیماری به دلیل اینکه افزایش قندخون در مراحل ابتدایی خیلی شدید نیست سریع تشخیص داده نمی شود. با این وجود این بیماران در معرض ابتلا به عوارض عروق خونی بزرگ و کوچک ( ماکرووسکولار[32]، میکرووسکولار[33]) می باشد. همچنین دیده شده است که در این افراد سطح انسولین خون طبیعی و یا حتی بالاتر است که این امر بیانگر آن است که سلول های بتای پانکراس این افراد سالم می باشد. خطر ابتلا به این نوع دیابت با سن، چاقی و عدم تحرک فیزیکی افزایش می یابد (2006 (American Diabetes Association. 1-2-3- دیابت حاملگی دیابت حاملگی حالتی است که در آن افزایش قند خون برای اولین بار در طی دوران بارداری( خصوصاَ سه ماه سوم ) دیده می شود. این نوع دیابت در 4 تا 10درصد موارد بارداری بروز می کند که سبب بروز مشکلاتی برای هم مادر و هم جنین می گردد. پیشگیری و کنترل دیابت در طی دوران بارداری ضروری است و در صورت عدم درمان و مدیریت می تواند فرد را بعد از بارداری در معرض ابتلا به دیابت نوع-II قرار دهد. دیابت حاملگی وقتی ایجاد می شود که گیرنده های انسولینی به خوبی عملکرد خود را انجام ندهند. به نظر می رسد که هورمون لاکتوژن جفتی[34] ترشح شده به وسیله جفت سبب کاهش حساسیت به انسولین می گردد(Thomas و همکاران 2005). 1-2-4- عوارض بیماری دیابت تنظیم قندخون تا حد زیادی عوارض ناشی از دیابت را کاهش می دهد. سیگار، افزایش کلسترول و فشار خون، چاقی و عدم تحرک فیزیکی از عوامل تسریع کننده عوارض دیابت هستند. عوارض دیابت قندی به طور عمده به دو دسته حاد و مزمن طبقه بندی می شود. عوارض حاد دیابت شامل کتواسیدوز، افزایش قند خون[35]، کاهش قند خون[36] و کمای دیابتی می باشد. عوارض مزمن دیابت خود به دو گروه بیماری ماکرووسکولار( عروق خونی بزرگ) و میکرووسکولار( عروق خونی کوچک) تقسیم بندی می گردد. این نوع عوارض اندام های بسیاری را تحت تأثیر قرار می دهد و به همین دلیل علت اصلی مرگ و میر دیابت محسوب می شوند. افزایش میزان قند خون سبب ضخیم شدن دیواره ی مویرگ ها شده که این پدیده سبب می شود که خون بر سطح داخلی مویرگ حالت چسبنده ای پیدا کند و به دلیل این پدیده گردش خون کاهش پیدا می کند. این اثرات در دراز مدت باعث آسیب به بافت هایی نظیر کلیه، چشم و اعصاب می شود. همچنین بالا بودن قند خون سبب سفتی سرخرگ ها ( تصلب شرائین[37]) می شود که این موضوع به بیماری های قلبی و مغزی منجر می گردد. بیماری قلبی یکی از علل مرگ و میر افراد دیابتی است به طوری که احتمال مرگ و میر افراد بالغ مبتلا به دیابت در اثر بیماری های قلبی 2 تا 4 برابر بیشتر از افراد غیر دیابتی است (2007 Centers for Disease Control and Prevention) . شایان ذکر است که خطر بروز بیماری قلبی- عروقی[38] در افراد دیابتی نوع- I نسبت به نوع - IIبسیار بالاتر است. پلاکت های افراد دیابتی معمولا نسبت به عوامل متراکم کننده ی پلاکت بسیار حساسند. ترومبوکسان[39] عامل اصلی متراکم سازی پلاکت ها و مسدود شدن رگ های خونی است. تحقیقات نشان داده اند که در افراد دیابتی نوع- II با بیماری قلبی-عروقی مقدار زیادی ترومبوکسان وجود دارد. یکی از داروهایی که به طور معمول به منظور پیشگیری و درمان بیماری های قلبی – عروقی تجویز می شود داروی آسپیرین است. بررسی ها نشان داده اند که مصرف روزانه ی 81 تا 325 میلی گرم داروی آسپرین به طور موثری سبب مهار سنتز ترومبوکسان می شود و احتمال ابتلا به بیماری قلبی- عروقی را در افراد دیابتی کاهش می دهد (1997Colwell، Hayden و همکاران 2002). 1-3- آسپرین آسپیرین( استیل سالسیلیک اسید) یک داروی غیراستروئیدی ضدالتهابی[40]است و یکی از داروهای پرمصرف جهان به شمار می رود به طوری که سالانه حدود 40000 تن از این دارو به مصرف می رسد. آسپیرین برای تسکین دردهای ملایم تا متوسط، سردرد، میگرن، کاهش تب و التهاب و درمان بیماری های التهابی چون پریکاردیت[41] و روماتیسم مفصلی[42] به کار می رود. همچنین این دارو به دلیل داشتن خاصیت ضد انعقاد خون می تواند به عنوان رقیق کننده خون به کار رفته و برای جلوگیری از وقوع سکته قلبی و یا مغزی در کسانی که سابقه آن را داشته اند مفید واقع شود. اخیرا بیان می شود که این دارو می تواند به منظور پیشگیری از برخی سرطان ها، خصوصا سرطان روده بزرگ[43] استفاده شود. عوارض جانبی این دارو نیز مانند بسیاری از داروهای دیگر مورد توجه پزشکان و مصرف کنندگان می باشد. از عوارض این دارو می توان به خونریزی معدی-روده ای[44]، مسمومیت کلیوی[45]، وزوز گوش[46] و واکنش های حساسیتی[47] مثل کهیر، خارش و تنگی نفس خصوصا در افراد مبتلا به آسم اشاره کرد (Alfonso و همکاران 2009). آسپیرین از دو بخش استیل و سالیسیلات تشکیل شده است که هر بخش عملکرد مشخصی دارند. گروه سالیسیلات عملکرد ضدالتهابی خود را از طریق مهار فاکتور B [48]NF-κانجام می دهد در حالی که گروه استیل سبب غیرفعال شدن آنزیم سیکلواکسیژناز[49] (COX) از طریق استیله کردن باقی مانده آمینواسیدی سرین می شود (Vane و همکاران 2003). آسپیرین به طور کامل از طریق دستگاه گوارش جذب می شود. این دارو ضمن گردش در پلاسما به یون استات و سالیسیلیک اسید تجزیه می شود. استفاده از آسپیرین نشاندار H3 و C14 نشان داده است که این ترکیب استیله کردن پروتئین ها در شرایط آزمایشگاهی[50] و درون بدن[51] را از طریق فرآیند ترانس استیلاسیون انجام می دهد. آسپیرین (استیل سالسیلیک اسید) یکی از عوامل استیله کننده است که باقی مانده انتهای N آمینواسید لیزین پروتئین هدف را استیله می کند( Rainsford و همکاران 1983). نیمه عمر این دارو با توجه به مقادیر مصرفی آن متفاوت است ولی به طور کلی حدود 3 تا 9 ساعت برآورد شده است. آسپرین و دیگر دارو های غیر استروئیدی- ضد التهابی مهارکننده های اصلی آنزیم Cox می باشند. Cox1 و Cox2 دو ایزوزیم آنزیم سیکلواکسیژنازهستند که در تولید پروستاگلاندین، پروستاسایکلین و ترومبوکسان دخیل اند. پروستاگلاندین ها و ترومبوکسان ها تولیدی به وسیله ی Cox به ترتیب عوامل پیش التهابی و انعقادی هستند. شکل1-6- نمایی از ساختار مولکولی داروی آسپیرین. 1-3-1- ساز و کار عملکرد آسپرین آسپرین به طور برگشت ناپذیر و غیر انتخابی هردو شکل آنزیم سیکلواکسیژناز را مهار می کند. این دارو به عنوان یک عامل استیله کننده عمل می کند به طوری که گروه استیل آن به گروه هیدروکسیل باقی مانده ی اسید آمینه ی سرین 530 در آنزیم سیکلواکسیژناز منتقل می شود. آسپیرین به دلیل ایمنی و ارزانی و موثر بودن در پیشگیری از بیماری قلبی و عروقی داروی مناسبی به شمار می رود. با توجه به استفاده آسپیرین به وسیله افراد دیابتی به منظور تعدیل عوارض ناشی ازاین بیماری، یکی از پروتئین های هدف این دارو، انسولین به ویژه شکل ذخیره ای به دلیل نیمه عمر بالای آن می باشد. انسولین دارای یک لیزین در زنجیره B (لیزین شماره 29) می باشد که جایگاه استیله شدن این پروتئین را در حضور عوامل استیله کننده فراهم می سازد. این پروتئین از خانواده پروتئین های آمیلوئیدوژنیک است به طوری که در شرایط ویژه ساختار فیبر مانندی موسوم به فیبرآمیلوئیدی ایجاد می کند. تحقیقات نشان می دهد که انسولین هم طی فرآیند تخلیص، هم در مدت انتقال و نگهداری و هم در محل تزریق عضلانی فیبر آمیلوئیدی تشکیل می دهد. از این رو انسولین همچون پروتئین های آلفاسینوکلئین و بتاآمیلوئید که نقش مهمی در بیماری های پارکینسون و آلزایمر دارند به عنوان یک پروتئین مولد فیبر آمیلوئیدی شناخته می شود.فیبرآمیلوئیدی پروتئین سمیت زیادی دارد به طوری که فرایند مرگ سلولی را در سلول های طبیعی و انواع سرطانی القاء می کند. از آن جایی که ساختار طبیعی این پروتئین در عملکرد زیستی آن اهمیت بسزایی دارد، لذا پیامد شرایطی که به پدیده توده شدن یا تشکیل فیبر آمیلوئیدی انسولین منجر شود به مشکلات اقتصادی و پزشکی مرتبط با این داروی پروتئینی می افزاید. 1-4- تا خوردگی و تجمعات پروتئینی یک موجود زنده سیستمی تکامل یافته ای متشکل از تعداد زیادی شبکه های مولکولی است. در چنین شبکه ای نقش کلیدی را پروتئین ها ایفا می کند. این ماکرو مولکول ها فرآیند های شیمیایی درون سلول را تنظیم می کنند. رسیدن به یک ساختار عملکردی از طریق بر همکنش بین باقی مانده های اسید آمینهی یک فرآیند اساسی برای عمکرد صحیح سیستم های زنده است. این فرآیند، تاخوردگی[52] پروتئین ها نامیده می شود. حالت فیبری پروتئین ها ساختاری است که از نظر ترمودینامیکی تحت شرایط فیزیولوژیکی پایدار است ( Dobsonو همکاران 1998). به منظور توصیف صحیح مسیر تاخوردگی پروتئین ها، مفهوم چشم انداز انرژی[53] در اواخر دهه 80 توسط جوزف برینگلسون[54] و پیتر والینس [55]مطرح شد (Bryngelson و همکاران 1987). بر اساس این طرح برای هر زنجیره پلی پپتیدی در پروتئین تعداد بسیار زیادی ساختار های فضایی ممکن (دارای حداقل انرژی) قبل از رسیدن به حالت کاربردی و نهایی وجود دارد که چنین فرآیندی از منظر انرژی طولانی (تناقض لوین[56] ) محسوب می شود. به منظور حل مشکل تناقض لوین یک توصیف قابل اعتماد تری برای تاخوردگی پروتئین ها تحت عنوان اصل حداقل سرخوردگی[57] مطرح شد. بر اساس این اصل در تکامل زیستی زنجیره های جانبی قطبی و آبگریز توالی اسید آمینهی پروتئین ها می توانند با یکدیگر برای رسیدن به حالت نهایی و تاخورده برهمکنش دهند. طبق این تعریف تعداد حداقل انرژی که پروتئین می تواند تجربه کند را کاهش می دهد (Dill و همکاران 1997، Wolynes و همکاران 1995). بدیهی است که جزئیات تاخوردگی بستگی به محیطی دارد که این فرایند در آن صورت می گیرد. در طول مسیر ممکن است ساختار های فضایی کاملا تا نخورده (حالت های حدواسط) در معرض برهمکنش های غیر صحیح با مولکول های حلال قرار بگیرند. چنین فعل و انفعالاتی سبب کاهش احتمال رسیدن به حالت طبیعی شده و یا منجر به ظهور گونه های غیر عملکردی در مسیر تاخوردگی شود. شکل1-7- نمایی از مراحل تاخوردگی پروتئین. برای جلوگیری از وقوع این پیامد نوعی تنظیم کیفی برای تا خوردگی پروتئین ها در طی تکامل زیستی ایجاد گردیده است. این تنظیم بر عهده مولکول های چاپرونی است که در تمامی قسمت های سلول حاضر هستند. این مولکول ها از ابتدای سنتز پروتئین به وسیله ی ریبوزوم تا انتهای مسیر تاخوردگی آن نقش ایفا می کنند (2001 Ellis ، Hartl و همکاران 2002). با وجود این پیشگیری و به دلیل پیچیدگی این فرآیند عدم تاخوردگی صحیح پروتئین همیشه می تواند اتفاق بیفتد و منجر به سوء عملکرد در سلول زنده و در نهایت ایجاد بیماری می گردد (2002 Horwich). در شکل 7-1 طرح حضور گونه های بالقوه در مسیر تا خوردگی پروتئین ها نمایش داده شده است. زمانی که یک زنجیره ی پلی پپتیدی نتواند به طور صحیح تا بخورد، حالت پایدار خود را از دست می دهد و جمعیت حالات تا نخورده و یا صحیح تا نخورده افزایش می یابد. این ساختار های باز پروتئین سبب افزایش تمایل بر همکنش مولکول های پروتئین با یکدیگر شده و گونه های الیگومری را به وجود می آورند (2004 Stefani). این بر همکنش ها می توانند به تشکیل تجمعات نامنظمی بیانجامد که اصطلاحا حالات بی شکل[58] گفته می شود و یا این که با برهمکنش های خاص تجمعات پروتئینی بسیار منظم به نام فیبرهای آمیلوئیدی را به وجود می آورد. ساز و کار تجمعات پروتئینی فقط مختص سلول نیست. در واقع می توان تحت تاثیر شرایط فیزیکی و شیمیایی خاص در شرایط آزمایشگاهی ایجاد تجمعات پروتئینی را القاء کرد. عوامل موثر در این پدیده شامل pH ، دما، قدرت یونی و عوامل واسرشته کننده می باشد(Jansenو همکاران 2005). در تجمعات پروتئینی بر همکنش های پروتئین- پروتئین و پروتئین- حلال وجود دارد. تغییر شرایط فیزیکی حلال مثل pH، نیروهای درگیر در بسته بندی صحیح پروتئین را تحت تاثیر قرار می دهد به طوری که بر همکنش های بین مولکولی جدید ایجاد می شود. تغییرات ساختار فضایی که ساختار های پروتئینی بی ثبات را ایجاد می کنند معمولا به عنوان گام کلیدی در فرآیند های تجمع شناخته می شوند (2004 Uversky). به طور خاص این مرحله شامل تضعیف برهمکنش ساختار دوم و سوم پروتئین ها خصوصا پیوند های هیدروژنی می باشد. در این شرایط پروتئین بد تاخورده[59] با ساختار حالت گویچه مانند[60] ایجاد می شود که در آن باقی مانده های اسید آمینه ای مخفی در معرض بر همکنش با حلال قرار می گیرند. شکل1-8- نمایی از ایجاد حالات مولکولی گوناگون در مسیر تاخوردگی پروتئین. 1-4-1- تجمعات منظم پروتئینی: فیبر آمیلوئیدی واژه آمیلوئید در سال 1854 توسط Virchow معرفی گردید. در قرن 19 و اوایل قرن 20 مطالعاتی بر روی ماهیت آمیلوئید و بیماری های مربوط به آمیلوئید در انسان صورت گرفته شد. در دهه های گذشته تحقیقات بسیاری به منظور فهم سازوکار مولکولی تشکیل فیبرهای آمیلوئیدی انجام شده است (Sipe و همکاران 2000، Attanasio و همکاران 2007). حدود 20 پروتئین آمیلوئیدی شناخته شده است که در انسان سبب بیماری های آمیلوئیدی می شوند. بیماری های انسانی مختلفی چون پارکینسون، سیستیک فیبروزیز، دیابت نوع- II با حضور پلاک های پروتئینی آمیلوئیدی درون بدن ها تشخیص داده می شود. اگر چه هنوز نقش و سازوکار فیبریل ها در بیماری زایی مشخص نشده است، مشاهدات تجربی بسیاری پیشنهاد می کنند که ارتباط قوی بین تشکیل فیبریل و شروع علائم بیماری وجود دارد (1996 Coelho). مطالعات ساختاری متعدد درون بدن زنده و در شرایط آزمایشگاهی نشان می دهند که صرف نظر از منشا پروتئین و یا بیماری مربوطه همه فیبر های آمیلوئیدی دارای خصوصیات مشترکی هستند. ساختار مشخص شده با اشعه X و پراش الکترونی[61] یک الگوی خاص را برای این نوع ساختار نشان می دهد. تصویر میکروسکوپ الکترونی فیبر های آمیلوئیدی نشان می دهد که این ساختارها دارای طولی حدود چند میکرومتر و ضخامتی حدود 5 تا 25 نانومتر را دارند (2007 Fandrich). علاوه بر این فیبرهای آمیلوئیدی در اتصال با نشانگرهای کنگورد و تیوفلاوین T (ThT) ویژگی های نوری خاصی را نشان می دهند. شکل1-9- تصویر شماتیک الگوی پراش اشعه X ساختار های بتا در فیبرهای آمیلوئید. 1-4-2- مراحل تشکیل فیبریل ها به طور کلی فیبریل ها طی سه مرحله تشکیل می شوند. مرحله اول وابسته به هسته زایی[62] است که مرحله ی محدود کننده سرعت[63] در فرآیند تشکیل فیبر محسوب می شود و از نظر ترمودینامیکی نامطلوب است. در این مرحله که با تغییرات ساختاری پروتئین طبیعی همراه است یکسری ترکیبات حد واسط تا نخورده ایجاد می شود که این ساختار ها ضمن بر همکنش با همدیگر الیگومرهایی تشکیل می دهند که به عنوان هسته اولیه برای تجمعات پروتئینی عمل می کنند. مرحله دوم مرحله طویل شدن[64] و افزایش طول فیبریل است که از نظر کینتیکی فرآیندی مطلوب می باشد و خیلی سریع تر از مرحله اول رخ می دهد. مرحله نهایی فاز تعادلی[65] است و سیستم از نظر ظاهری حالت ایستایی دارد. همچنین در این مرحله بر همکنش های جانبی بین فیبریل ها صورت می گیرد و فیبریل های بالغ و ضخیم ایجاد می گردد(Ahmad و همکاران2003، O’nuallainو همکاران 2006، Waugh و همکاران 1953). مطالعات نشان می دهند که افزودن هسته های از پیش تشکیل شده با کاهش زمان مرحله اول سبب تسریع تشکیل فیبریل آمیلوئیدی می شود. شکل1-10- کینتیک تشکیل فیبر آمیلوئیدی. شکل 1-11- نمایی از ساز و کار فیبریلاسیون هورمون انسولین. 1-4-3- پدیده فیبریلاسیون هورمون انسولین با توجه به این که تجمعات پروتئینی در زمینه های بیوشیمیایی و پزشکی تبعات جدی به وجود می آورند مطالعه این موضوع مورد توجه بسیاری از محققین می باشد. انسولین از جمله پروتئین هایی است که توانایی تشکیل فیبریل آمیلوئیدی را دارد که این پدیده موجب بروز مشکلاتی در زمینه پزشکی و دارویی می شود. مطالعه بر روی فیبریلاسیون انسولین از اوایل قرن بیستم شروع شد. پلاک آمیلوئیدی انسولین در بیماران دیابتی خصوصا بعد از تزریق مکرر زیر پوستی این هورمون گزارش شده است. بنابراین به نظر می رسد که مطالعه فیبریلاسیون انسولین یک راه درمان برای برای افراد دیابتی باشد. طی بررسی های مختلف تشکیل فیبرهای آمیلوئیدی انسولین، در شرایط متفاوت دیده شده است. برای مثال انسولین قادر است در5/2pH و دمای 37 درجه سانتی گراد فیبر آمیلوئیدی تشکیل دهد. همچنین می توان در 5/7pH و دمای 37 درجه سانتی گراد با استفاده از یک جداکننده یون روی مانند اتیدیوم دی آمیدتترااستیک اسید (EDTA) برای تبدیل شکل هگزامر به مونومر انسولین، ایجاد فیبرهای آمیلوئیدی انسولین را در pH فیزیولوژیک تسریع کرد. همچنین تحقیقاتی در زمینه آمیلوئیدی شدن انسولین و اثبات این موضوع که زنجیره B در آمیلوئیدی شدن این پروتئین نقش کلیدی دارد صورت گرفته است. نتایج نشان داده است که زنجیره B انسولین گاوی به تنهایی قادر به تشکیل فیبر در شرایط اسیدی می باشد. در واقع تشکیل فیبرهای آمیلوئیدی انسولین شامل دو فاز می باشد. فاز اول، فاز کند واکنش است و طی آن زنجیره B انسولین، فیبر آمیلوئید تشکیل می دهد و فاز دوم که فاز سریع واکنش است که طی آن سایر قسمت های فیبر انسولین در تشکیل فیبر شرکت می کند (Mauro و همکاران 2007،Hua و همکاران 2004). کینتیک فیبریلاسیون انسولین به کمک فلورسانس محیطی در حضور تیوفلاوین (ThT) Tتوسط Atta Ahmad در سال 2003 و در شرایط 4/7pH و در حضور غلظت های مختلف گوانیدین هیدروکلراید مطالعه گردید. نتایج پژوهش های پیشین نشان داد که گوانیدیوم هیدروکلرید در غلظت پائین (زیر 7/0 مولار) باعث کاهش فاز تاخیری و تسریع فیبریلاسیون انسولین می شود. اما این ترکیب در غلظت های بالاتر (5 مولار) با از بین بردن برهمکنش غیر کووالان درون مولکولی مانع از فیبریلاسیون انسولین می شود. این گروه در مطالعه ی دیگر به بررسی اثر غلظت اوره در کینتیک فیبریلاسیون انسولین متوجه شدند که 3 مولار اوره بهترین غلظت برای القا فیبریلاسیون انسولین است ( Ahmadو همکاران 2003). بطور کلی در فیبریلاسیون انسولین، pH پائین (حدود 5/1) و ارتعاش محیط باعث می شود که انسولین هگزامر ابتدا به حالت دیمر و آنگاه به صورت مونومر تبدیل شود. اگر چه تشکیل فیبر آمیلوئیدی به فرایندهای هسته ای شدن آن بستگی دارد، اما ویژگی فرایندهای هسته ای شدن بطور کامل شناخته نشده است. به نظر می رسد که هر عاملی که واسرشتگی مونومرهای انسولین را القا کند باعث تسریع فیبریلاسیون انسولین می شود. به عنوان مثال واسرشته کننده های شیمیایی (گوانیدین هیدروکلرید) و افزایش دما با باز کردن ساختار انسولین به القا فیبریلاسیون در این پروتئین منجر می شود. در مطالعه ی دیگری که توسط وسترگارد[66] و همکاران بر روی ساختمان کروی انسولین صورت گرفت، نشان داده شد که 5 تا 6 مونومر انسولینی در یک ساز و کار هسته زایی گرد هم جمع می شوند و یک ساختار کروی بوجود می آورند. سپس 13 عدد از این ساختارهای کروی برای ایجاد فیبر آمیلوئیدی انسولین اجتماع می کنند (Vestergaardو همکاران 2007). تجمع انسولین به صورت فیبرهای آمیلوئید در محل تزریق زیر پوستی انسولین و همچنین در هنگام استفاده از پمپ های انسولین در بیماران دیابتی مشاهده شده است. این تجمع باعث بروز پاسخ های ایمنی ناخواسته می شود (Dische و همکاران 1988). جهت تشکیل هسته اولیه برای تولید فیبرآمیلوئیدی انسولین ابتدا یک پروتوفیلامنت با قطر 2/1 نانومتر ایجاد می شود. سپس 4 پروتوفیلامنت دو پروتوفیبریل با قطر 9/1 نانومتر می سازد و در مرحله بعدی با بهم پیچیدن دو پروتوفیبریل یک فیبر انسولین با قطر 3 نانومتر ایجاد می­شود. البته در مدل های تجربی یک فیبر با قطر 8/4 نانومتر هم دیده شده که احتمالا" در اثر بهم پیچیدن یک پروتوفیبریل و یک فیبر تشکیل شده است (Khurana و همکاران 2003). در هنگام به هم تابیدن پروتوفیبرها قسمت هایی که با یکدیگر برهمکنش می کنند ثابت می باشد و دارای ساختار بتا است. همچنین نواحی که با هم برهمکنش ندارند اغلب متغیرند و ساختار لوپ مانند ایجاد می کنند. هنگامی که پروتئین از حالت طبیعی خارج می گردد نواحی آبگریز داخلی آن بیشتر در معرض محیط آبی قرار می گیرد. این نواحی با غشاء، متابولیت های کوچک، پروتئین ها و بسیاری از مولکول های دیگر که در محیط غلیظ داخل و خارج سلولی وجود دارند، برهمکنش می کنند (Xue و همکاران 2009). یکی دیگر از اختلالات مرتبط با فیبر آمیلوئیدی که مطالعات زیادی در مورد آن انجام شده است تغییر فعالیت و ساختار غشاء های سلولی و هموستازی یونی سلول در حضور این فیبرها است. فیبر آمیلوئیدی این عمل را ضمن برهمکنش با غشا و ایجاد گونه های فعال اکسیژنی[67] (ROS) و افزایش کلسیم درون سلولی انجام می دهند که در نهایت به مرگ سلول منجر می شود. پروتئین در حالت فیبر به ویژه در حالات اولیگومری، می توانند در غشا نفوذ کنند و حتی کانال تشکیل دهند. آپاپتوز یا نکروز سلولی یکی دیگر از عوارض ناشی از تشکیل فیبر آمیلوئیدی و تشکیلات حد واسط آن ها در سلول می باشد (Gharibyan و همکاران 2007) . شکل1-12- مدل سلسله مراتبی تجمع انسولین در تشکیل فیبر آمیلوئیدی. 1-5- نقش چاپرون ها در جلوگیری از فرآیند توده ای شدن و فیبریلاسیون پروتئین ها فرآیندتاخوردگی پروتئین ها در طی روند تکامل به وسیله سیستم های پشتیبانی درون سلول ها توسعه یافته است. این سیستم ها شامل خانواده های پروتئینی بسیار حفاظت شده ای است که مولکول های چاپرون نامیده می شوند و در غلظت های زیاد در تمامی سلول های زنده یافت می شوند (Mogk و همکاران 2002). چاپرون ها فرآیندهای تاخوردگی متنوعی را در طول عمر پروتئین ها از سنتز آنها تا تجمع و انتقال، عبور و مرور پپتیدها و تجزیه شدن شان هدایت می کنند(Barral و همکاران 2004). از آنجایی که شوک حرارتی سنتز این پروتئین ها را شدیدا القا می کند به آنها پروتئین های شوک حرارتی[68] گفته می شود. نقش این پروتئین ها جلوگیری از تغییر ساختار در پروتئین ها تحت عوامل استرس زا همچون استرس های اکسایشی، فلزات سنگین، خشکی، نمک و مواد شیمیایی سمی می باشد (Boston و همکاران 1996). پروتئین های شوک حرارتی به جایگاه های آبگریز برروی پلی پپتیدها متصل گشته و سبب بروز تغییرات ساختاری در آنها می گردند. با توجه به تحقیقات گذشته مشخص شده است که استفاده از پروتئین های آلفا کریستالین و بتا کازئین به عنوان چاپرون های مولکولی بسیار کارآمد می باشد. 1-5-1- چاپرون های آلفا کریستالین و بتا کازئین آلفا کریستالین متعلق به خانواده پروتئین شوک حرارتی و پروتئین اصلی تشکیل دهنده لنز است که در مهره داران بر اساس اندازه به چهار گروه شامل آلفا، بتا، گاما و دلتا تقسیم می شود. آلفا، بتا و گاما در اکثر مهره داران وجود دارد، اما زیر واحد دلتا فقط در پرندگان و خزندگان دیده می شود (de Jong و همکاران 1989، Simpsonو همکاران1994 ، Horwitz و همکاران 2000). آلفاکریستالین پروتئینی متشکل از دو زیر واحد αA ( با 177 اسید آمینه) و αB(با 175 اسید آمینه) است و نقش مهمی در شفافیت لنز و پیشگیری از آب مروارید دارد. در لنز مهره داران زیر واحدهای αA و αB به نسبت 3 به 1 وجود دارند. این پروتئین بسیار مشابه پروتئین های شوک حرارتی 15 تا 30 کیلو دالتونی (به ویژه در ناحیه انتهای C) است. کریستالین با عملکرد چاپرونی خود مانع تجمع و رسوب پروتئین های واسرشته و افزایش تحمل استرس سلولی می شود. آلفا کریستالین در هنگام شرکت در فعالیت چاپرونی یک اولیگومر 300 تا 800 کیلو دالتونی ایجاد می کند، در صورتیکه وزن مونومر آن حدود 20 کیلو دالتون است (Maulucci و همکاران 2011). نقش حفاظتی آلفا کریستالین در مقابل استرس های محیطی از طریق مهار پدیده تجمع پروتئین ها است. پروتئین های شیر شامل دو گروه کازئین ها (حدود 80%) و پروتئین های سرمی شیر (20%) می باشد. کازئین ها خود به 4 گروهαS1، αS2، β و κ تقسیم بندی می شود. پروتئین بتا کازئین شیر با 209 اسید آمینه عضو خانواده پروتئین های بدون ساختار[69] (IUP) است (O’Connell و همکاران 2003). یکی از عملکردهای بتا کازئین، فعالیت چاپرونی آن است که پروتئین را در برابر استرس ناشی از فرآیند توده ای شدن محافظت می کند و از تجمع رسوب فیبر آمیلوئیدی در غدد پستان جلوگیری می کند. پروتئین های چاپرونی آلفا کریستالین و بتا کازئین هر دو آمفی فیلیک (دارای یک سر قطبی و یک سر غیرقطبی) هستند. انتهای N آلفا کریستالین از انتهای C آن آبگریزتر است، در حالیکه در بتا کازئین انتهای C آن آبگریزتر است. دُمین های آبگریز این چاپرون ها، پایداری این پروتئین ها را افزایش می دهند (Lindner و همکاران 2000). در کل پروتئین های آلفا کریستالین و بتا کازئین به عنوان چاپرون به رسمیت شناخته شده اند و با اتصال به حد واسط های پروتئین هدف، کمپلکس محلول چاپرون- پروتئین هدف ایجاد می کنند (Carver و همکاران 2003). [1] Oskar minkowski [2] Joseph von mering [3] Frederick banting [4] Charles best [5] Macleod [6] .Kolip [7] Alpha helix [8] Beta sheet [9] Beta turn [10] Aggregation [11] Amyloid fiber [12] .Circular dichroism [13] Signal peptide [14] Signal recognition particle [15] Steiner [16] C-peptide [17] Abel [18] Scott [19] Lipolysis [20] Hyperinsulinemia [21] Polydipsia [22] Polyphasia [23] Polyuria [24] Fasting hyperglycemia [25] Human leukocyte antigen [26] Graves disease [27] Addisons disease [28] Pernicious anemia [29] Hashimoto’s thyroiditis [30] Idiopathic diabetes [31] Ketoacidosis [32] Macrovascular [33] Microvascular [34] Human placental lactogen [35] Hyperglycemia [36] Hypoglycemia [37] Atherosclerosis [38] Cardiovascular disease [39] Thromboxane [40] Nonsteroidal anti-inflammatory drug [41] Pericarditis [42] Rheumatoid arthritis [43] Colorectal cancer [44] Gastrointestinal bleeding [45] Nephrotoxicity [46] Tinnitus [47] Allergic reactions [48] Nuclear factor κB [49] Cyclooxygenase [50] In Vitro [51] In Vivo [52] Folding [53] Concept of energy landscape [54]Joseph Bryngelson [55] Peter Wolynes [56] Levinthals Paradox [57] Principle of minimal frustration [58] Amorphous [59] Misfold [60] Molten globule like structure [61] Electron diffraction [62] Nucleation [63] Rate limiting step [64] Elongation [65] Equilibrium phase [66]Vestergaard [67] Radical oxygen species [68] . Heat shock protein [69]Intrinsically unstructured protein دریافت فایل مطالعه نقش استیله شدن بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی هورمون انسولین...

پلان فرودگاه

پلان فرودگاه پروژه کامل پلان فرودگاه (پایان نامه یا طرح نهایی) با پلان های کامل 2 عدد برش و مقطع 2 عدد نما 12 رندر با کیفیت برای خرید این پروژه بر روی گزینه توضیحات بیشتر / دانلود کلیک کنید سپس شماره موبایل و ایمیل خود را وارد کنید مستقیم به درگاه بانک هدایت میشوید پس از واریز مبلغ پروژه لینک دانلود برای شما نمایش داده میشود و یک ایمیل حاوی لینک دانلود نیز یه ایمیلتان ارسال می شود. دریافت فایل پلان فرودگاه

دانلود حل تمرین شیمی کوانتومی ایرا لواین ویرایش 7

دانلود حل تمرین شیمی کوانتومی ایرا لواین ویرایش 7 دانلود حل تمرین شیمی کوانتومی ایرا لواین ویرایش 7 حل المسائل شیمی فیزیک لواین تعداد صفحات : 295 فرمت : PDF زبان: لاتین دانلود در ادامه .... دریافت فایل دانلود حل تمرین شیمی کوانتومی ایرا لواین ویرایش 7

اقدام پژوهی معلم پایه دوم ابتدایی چگونه توانستم ضعف جمله نویسی مهراب را برطرف کنم ؟

اقدام پژوهی معلم پایه دوم ابتدایی چگونه توانستم ضعف جمله نویسی مهراب را برطرف کنم ؟ اقدام پژوهی معلم پایه دوم ابتدایی چگونه توانستم ضعف جمله نویسی مهراب را برطرف کنم ؟در قالب ورد و قابل ویرایش در26 صفحه بهترین نمونه در فضای مجازی مقدمه نوشتن نخستین نشانة با سوادی است و اهمیت صحیح نوشتن کلمات به اندازه ای است که مردم عموماً غلط نوشتن کلمات را بارزترین نشانة بی سوادی می دانند ، اهمیت نوشتن و نیاز به صحیح نوشتن در ایجاد ارتباط با دیگران بر کسی پوشیده نیست . چرا که آدمی اجتماعی است و نمی تواند از ارتباط با افراد اجتماع صرف نظر کند و به ناچار جنبه هایی از شخصیتش در نوشته هایش مانند ، نامه های دوستانه و رسمی و تجاری و درخواست ها و مکاتبات ، جلوه می کند و از آنجا که بیشتر مشاغلی که افراد تحصیل کرده در اجتماع دارند به صحیح و دقیق نوشتن نیاز دارد . به همین جهت از ابتدای آموزش رسمی خواندن و نوشتن ، به کودکانمان می آموزیم که چگونه بنویسند و اقداماتی در این باره انجام می دهیم تا بتوانند آموخته های خویش را در هر موقعیتی به کار بندند . جامعه نیز از دانش آموزانی که در مدارس درس می خوانند انتظار دارند کلمات زبان رسمی خود را صحیح بنویسند و این انتظار به حق است و به جاست که وزارت آموز ش و پرورش از راه های مختلف برای رسیدن به این مقصود و برآوردن این انتظار اقدام کند . اولین بخشی از آموزش که به این مسئله می پردازد جمله نویسی است. اما متأسفانه مشاهده می شود کاستی ها و ضعف هایی در آموزش این درس وجود دارد و بسیاری از دانش آموزان در نوشتن کلمات آموخته شده در متن هایی به جز متن درسی مشکل دارند و انتظارات ما را برای کاربرد صحیح کلمات و رعایت قواعد نوشتن آنها در هر موقعیت و متنی برآورده نمی کنند . بیان مسئله در بسیاری از مدارس ما توجه به صحیح نوشتن کلمات محدود می شود ، آن هم به این صورت گذرانده می شود که معلم متنی را برای دانش آموزان می خواند تا بنویسند . پس از پایان ، آنها را صحیح می کند و سپس تکلیفی را که معمولاً شامل چند بار نوشتن از روی کلماتی که در متن اشتباه نوشته شده است و یا رونویسی از روی درس می باشد را به فراگیران پیشنهاد می کند . و در جلسة بعد پس از بازدید تکالیف ، متن دیگری را برای کلاس می خواند . در این برنامه کمتر جایی برای آموزش نوشتن صحیح کلمات و یادگیری شکل ، معانی و مفاهیم کلمات جدید و جمله نویسی و موارد استعمال آنها و تنوع در نحوة آموزش وجود دارد .... منابع و ماخذ : 1- باقری٬ خسرو. نوشتن رویش اندیشه مجموعه مقالات سمپوزیوم نقش آموزش ابتدایی و جایگاه مطلوب آن در جامعه٬ 1370 . 2- شقاقی٬ محمد جواد ضرورت تحول در درس انشاء فارسی٬ مجموعه مقالات سمپوزیوم نقش آموزش ابتدایی وجایگاه مطلوب آن در جامعه٬ 1370 . 3- عباسیان٬ شهناز بررسی جایگاه درس انشاء از دیدگاه دانش آموزان سوم راهنمایی و دبیران دوره راهنمایی. 4- انشاء٬ دیدگاه ها٬ روش ها. سید حسین حسینی ﻨﮋاد. 5- اقدام ﭘﮋوهی ( راهبردی برای آموزش و تدریس ). گروه نویسندگان. 6- راهنمای معلمان ﭘﮋوهنده. دکتر اقبال قاسمی پویا. 7- نگاه به رویدادهای آموزش و پرورش. شماره ی 265 .   اقدام پژوهی معلم پایه دوم ابتدایی چگونه توانستم ضعف جمله نویسی مهراب را برطرف کنم ؟در قالب ورد و قابل ویرایش در26 صفحه بهترین نمونه در فضای مجازی در این قسمت خرید و دانلود کنید. دریافت فایل اقدام پژوهی معلم پایه دوم ابتدایی چگونه توانستم ضعف جمله نویسی مهراب را برطرف کنم ؟

رابطه بین هموارسازی سود و عدم تقارن اطلاعاتی در چرخه زندگی شرکت های بورس اوراق بهادار تهران...

رابطه بین هموارسازی سود و عدم تقارن اطلاعاتی در چرخه زندگی شرکت های بورس اوراق بهادار تهران...  چکیده:1 فصل اول:کلیات تحقیق 1-1مقدمه3 1-2 بیان مسئله4 1-3 اهمیت تحقیق5 1-4 چارچوب نظری و مدل تحقیق6 1-5فرضیه‌های تحقیق7 1-6 اهداف تحقیق8 1-6-1 اهداف علمی8 1-6-2 اهداف کاربردی8 1-6-2-1 کاربران مستقیم8 1-6-2-2 کاربران غیرمستقیم8 1-7 حدود مطالعاتی9 1-7-1 قلمرو مکانی تحقیق9 1-7-2 قلمرو زمانی تحقیق9 1-7-3 قلمرو موضوعی تحقیق9 1-8 تعریف واژگان کلیدی و اصطلاحات9 فصل دوم:مروری بر ادبیات تحقیق 2-1 مقدمه12 2-2 هموارسازی سود و مفاهیم آن13 2-2-1هموار سازی سود13 2-2-2 علل هموار سازی سود توسط مدیران13 2-2-2-1اندازه شرکت13 2-2-2-2 مالیات بر در آمد14 2-2-2-3 قراردادهای بدهی14 2-2-2-4 فاصله گرفتن فعالیت‌های عملیاتی واقعی از فعالیت‌های عملیاتی مورد انتظار14 2-2-2-5 تغییر پذیری سود14 2-2-3انگیزه های هموار سازی سود15 2-2-4 ابعاد هموار سازی سود18 2-3 شکل گیری مفهوم عدم تقارن اطلاعاتی19 2-4 ورود مفهوم عدم تقارن اطلاعات به بازار های سرمایه21 2-5عدم تقارن اطلاعاتی و بورس اوراق بهادار تهران21 2-6 برابری در توزیع اطلاعات22 2-7 عدم تقارن اطلاعات و کارایی بازار23 2-7-1 شکل ضعیف24 2-7-2 شکل نیمه قوی25 2-7-3 شکل قوی25 2-8 عدم تقارن اطلاعاتی و دامنه قیمت پیشنهادی خرید و فروش سهام26 2-9 عدم تقارن اطلاعات و فرضیه پیام دهی28 2-10 پیامدهای عدم تقارن اطلاعاتی در بازار سرمایه28 2-11 تئوری چرخه عمر شرکت31 2-12 نحوه طبقه بندی شرکت‌ها به مراحل چرخه عمر36 2-13 پیشینه تحقیق38 2-13-1 پژوهش‌های داخلی38 2-13-2 پژوهش‌های خارجی45 فصل سوم:روش‌ اجرای تحقیق 3-1 مقدمه50 3-2 روش تحقیق51 3-3 جامعه مطالعاتی و نمونه آماری51 3-4 مدل تحقیق و شیوه اندازه گیری متغیرها53 3-4-1 مدل تحلیلی تحقیق53 3-4-2 مدل پژوهش53 3-5فرضیه‌های تحقیق59 3-6 قلمرو تحقیق59 3-6-1 قلمرو مکانی تحقیق60 3-6-2 قلمرو زمانی تحقیق60 3-6-3 قلمرو موضوعی تحقیق60 3-7 روش های جمع آوری داده ها60 3-8 روش تجزیه و تحلیل اطلاعات61 3-8-1 روش برآورد الگوهای رگرسیون خطی61 3-8-2 منطق آزمون فرضیه61 3-8-3 معیار آزمون62 3-8-4 ضریب تعیین62 3-8-5 انواع داده‌ها62 3-8-6 آزمون تشخیص دوربین- واتسون63 3-8-7 آزمون کولموگوروف- اسمیرنوف Ks64 3-8-8 آزمون نابرابری واریانس های جملات اختلال64 3-8-9 تحلیل رگرسیون64 3-8-10 مدل های داده های تابلویی66 3-8-11 آزمون لیمر (معنی دار بودن اثرات فردی)67 3-7-12 آزمون هاسمن69 3-7-13 آزمون مانایی69 3-7-14 معرفی نرم افزار Eviews70 فصل چهارم:تجزیه و تحلیل داده‌ها 4-1مقدمه‏72 4-2 توصیف یافته ها73 4-3 تحلیل یافته ها76 4-3-1 تحلیل پیش فرض ها76 4-4 آزمون فرضیات پژوهش84 فصل پنجم:نتیجه‌گیری و پیشنهادات 5-1مقدمه93 5-2 ارزیابی و تشریح نتایج آزمون فرضیه‌ها93 5-2-1 بررسی فرضیه اصلی اول94 5-2-2 بررسی فرضیه اصلی دوم94 5-2-3 بررسی فرضیه اصلی سوم94 5-3 پیشنهادها95 5-3-1 پیشنهادهایی در راستای یافته های پژوهش95 5-3-2 پیشنهادهایی برای پژوهش‌های آتی96 5-4 محدودیت‌های انجام پژوهش96 منابع و ماخذ منابع فارسی:99 منابع لاتین:102 پیوستها پیوست الف: پرسشنامه106 چکیده لاتین112  جدول 2-1 استراتژی‌های مرحله ظهور33 جدول 2-2 استراتژی‌های مرحله رشد34 جدول 2-3 استراتژی‌های مرحله بلوغ35 جدول 2-4 استراتژی‌های مرحله افول36 جدول 2-5 طبقه بندی شرکت‌ها به مراحل چرخه عمر37 جدول 3-1 مراحل مختلف نمونه گیری52 جدول 3-258 جدول 4-1 اندازهشاخصهایآمارتوصیفیمربوطبهمتغیرهایتحقیق-مرحله افول73 جدول 4-2 اندازهشاخصهایآمارتوصیفیمربوطبهمتغیرهایتحقیق-مرحله بلوغ74 جدول 4-3 اندازهشاخصهایآمارتوصیفیمربوطبهمتغیرهایتحقیق-مرحله رشد74 جدول 4-4 بررسی فرض نرمال بودن متغیروابسته77 جدول 4-5 بررسی فرض نرمال بودن متغیرهای تبدیلی78 جدول 4-6 نتایج آزمون ناهمسانی وایت78 جدول 4-7 بررسی فرض همبسته نبودن خطاها79 جدول 4-8 ضرایب همبستگی متغیرهای مستقل81 جدول 4-9 نتایج آزمون F لیمر(همسانی عرض از مبدأهای مقاطع)83 جدول 4-10 نتایج آزمون هاسمن (انتخاب بین اثرات ثابت و تصادفی)84 جدول 4-11 ضریب همبستگی پیرسونبین هموارسازی و عدم تقارن اطلاعاتیدر مرحله افول90 جدول 4-12 براورد رگرسیونی برای رابطه بین عدم تقارن اطلاعاتی و هموار سازی سود در مرحله افول90 جدول 4-13 ضریب همبستگی پیرسونبین هموار سازی و عدم تقارن اطلاعاتیدر مرحله بلوغ87 جدول 4-14 براورد رگرسیونی برای رابطه بین عدم تقارن اطلاعاتی و هموار سازی سود در مرحله بلوغ88 جدول 4-15 ضریب همبستگی پیرسونبین هموار سازی و عدم تقارن اطلاعاتیدر مرحله رشد85 جدول 4-16 براورد رگرسیونی برای رابطه بین عدم تقارن اطلاعاتی و هموار سازی سود در مرحله رشد86 جدول 4-17 خلاصه یافته های حاصل از بررسی ارتباط بین متغیرهای پژوهش91  نمودار 1-1 مدل مفهومی تحقیق7 نمودار 2-1 رابطهبینقابلیتکنترلوانعطافپذیریدرچرخهعمرواحدتجاری31 نمودار 3-1 مدل تحلیلی پزوهش53 چکیده: هموارسازیسود،تلاشاعمالشدهتوسطمدیریتجهتکاهشتغییراتغیرعادیدر سوددرقالباصولحسابداریتعریفمیشود. دراینپژوهشرابطهبینهموارسازیسودوعدم تقارناطلاعاتی درچرخه زندگی واحدهای تجاری موردبررسی وسنجش قرارگرفته است.در راستای انجام تحقیق درخصوص موضوع مورد نظر و همچنین آزمون فرضیه‌های تحقیق کلیه شرکتهای پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران در قلمرو زمانی 1387-1391 به عنوان جامعه آماری درنظر گرفته شده است. تعداد نمونه‌ها براساس محدودیت های تحقیق، دربازه زمانی 5ساله ، 87 شرکت می‌باشند. در تحقیق حاضر جهت انجام آزمون فرضیات اصلی تحقیق از تحلیل رگرسیونو ضریب همبستگی پیرسون استفاده گردیده است. ابزارگردآوری اطلاعات، اسناد کاوی و بانکهای اطلاعاتی می باشد. داده های مورد نیاز شامل هموار سازی و عدم تقارن اطلاعاتی از اطلاعات مالی مندرج در صورتهای مالی حسابرسی شده آنها و گزارش‌های مالی و نشریه‌های رسمی سازمان بورس اوراق بهادار که بصورت هفتگی، ماهانه و سالانه صورت‌های مالی شرکت‌های پذیرفته‌‌شده را به چاپ می‌رساند و نیز از بانک‌های اطلاعاتی بورس بوده، که این اطلاعات از سـوابق موجـود در نـرم افزار ره آورد نوین و سایر نرم افزارها و در مواردی از آرشیوهای الکترونیکی و اینترنتی استخراج شده است. درراستای هدف تحقیق 3فرضیه تدوین گردیده وبرای تجزیه وتحلیل داده ها وآزمون فرضیه هاازمدل رگرسیون چندمتغیره وداده های ترکیبی استفاده شده است. مهمترین یافته‌های تحقیق عبارت است از اینکه بین هموارسازی سود وعدم تقارن اطلاعاتی درهیچ یک ازمراحل چرخه عمرشرکت رابطه معناداری وجودندارد. که نتایج حاصل شده حاکی از ناآگاهی سرمایه گذاران نسبت به هموار سازی سود می باشد.  واژه های کلیدی: هموارسازی سود،اقلام تعهدی اختیاری٬چرخه عمرشرکت٬عدم تقارن اطلاعاتی  فصل اول کلیات تحقیق  1-1مقدمه از دیدگاه تئوری حسابداری، پدیده هموارسازی سود در رویکرد رفتاری موضوعی قابل تأمل است. افزون بر آن در عمل نیز حسابداران، حسابرسان و تحلیل گران مالی در فرایند گزارشگری مالی، که گزارشگری سود از مهم‌ترین اجزای آن به شمار می‌آید، به نوعی با این پدیده و پیامدهای آن مواجه بوده‌اند. شناخت ابعاد مختلف رفتار هموارسازی سود در راستای شناسایی ویژگی‌ها و محدودیت‌های سود حسابداری قرار می‌گیرد. در صورت امکان ارائه یک چارچوب نظری برای این پدیدهکه به نظر می‌رسد تاکنون میسر نشده، محتمل است بتوان به پیشرفتی در زمینه کیفی گزارشگری سود دست یافت. سهم عمده ای از تحقیقات و مطالعات نظری در موضوع هموارسازی سود، متعلق به کشورهای توسعه یافته است، از این رو، با توجه به تفاوت‌های اساسی در متغیرهای کلان محیطی نظیر اقتصاد و فرهنگ، گسترش این تحقیقات به کشورهای در حال توسعه می‌تواند در تکمیل ادبیات پژوهشی این پدیده موثر واقع شود. علاوه بر آن به نظر می‌رسد از دیدگاه امور مالی نتایج این تحقیقات برخی زمینه های لازم را برای کارایی بازار سرمایه در محیط اقتصادی مورد نظر فراهم نماید. تحقیق حاضر به بررسی رابطه بین هموارسازی سود و عدم تقارن اطلاعاتی در چرخه زندگی شرکت‌های بورس اوراق بهادار تهران می‌پردازد. در این فصل کلیات تحقیق ارائه گردیده، در واقع پس از ارائه مقدمه‌ای در ابتدای فصل به تشریح بیان مسئله پرداخته شده است. سپس اهداف، انگیزه، فرضیه‌ها، اهمیت موضوع و روش تحقیق را شرح داده و به قلمرو تحقیق از لحاظ زمانی، مکانی و موضوعی تحقیق می‌پردازیم. 1-2 بیان مسئله ابزاراصلیانتقالاطلاعاتبهاستفاده کنندگانبرون سازمانی،صورت‌هایمالیاساسیاست.صورتسودوزیان،ازصورت‌هایمالیاساسیاستکهدرارزیابیوظیفهمباشرتمدیریتیاحساب دهیآن‌هادرقبالمنابعیکهدراختیاردارند،ازاهمیتزیادیبرخورداراست.صورتسودوزیاندربرگیرندهبازدهحاصلازمنابعتحتکنترلمدیریتواحدتجاریاستوعملکردواحدتجاریرادرطیدورهمورد نظرمنعکسمی‌کند.از آنجا کهمسئولیتتهیهصورت‌هایمالیبرعهدهمدیریتواحدتجاریاستوباتوجهبهدسترسیمستقیممدیرانبهاطلاعاتوداشتنحقانتخابروش‌هایاختیاریحسابداری،امکان هموارسازیسودوجوددارد.بهدلیلاینکهسرمایه گذارانبهعنوانیکیازفاکتورهایمهمتصمیم‌گیریبهرقمسودتوجهخاصیدارند،اینپژوهش‌هاازجنبه‌یرفتاری،اهمیتخاصخودرادارند.ازانگیزههایمدیریتسود،کاهشخطایپیشبینیسوددردورهجاریوآتیاست.مدیرانعلاقه‌مندمی‌باشند کهپیش‌بینی‌هایآن‌هادررابطهباسودبودجهشدهتحققیابد؛چنانچهاینامرمحققنشود،مدیرانبااستفادهازابزارهاییسودرامدیریت می‌کنند. استفادهفرصت‌طلبانهازهموارسازیسود،ممکناستبرشفافیتداده­هایگزارششدهحسابداریتأثیرمعکوسبگذارد.ازنتایجاقتصادیغیر شفافبودناطلاعاتایناستکهممکناستبرتمایلسرمایه گذارانبهخریدسهامشرکتتأثیربگذارد.بدینترتیبشفافیتکمترباعثنقدشوندگیکمترودرنتیجهباعثافزایشهزینهسرمایهشرکتبه دلیلافزایشریسکنقدشوندگیمی‌شود.علاوهبر این،بالارفتنهزینهمعاملاتبهدلیلنقدشوندگیپایین،ممکناستامکانکشفقیمتسهامراکاهشدادهودرنتیجهابهاممرتبطباقیمتسهمراافزایشدهد.ازسویدیگربر اساسمفهومعدمتقارناطلاعاتی،تغییرپذیریبالایسودمنجربهمنافعاطلاعاتیبیشتربرایسرمایه گذارانآگاهنسبتبهسرمایهگذارانناآگاهمی‌شود.افزایشتغییرپذیریسودهایگزارششده،زیانمعاملاتیسرمایهگذارانناآگاهرابزرگ‌ترجلوهدادهوآن‌هارامجبوربهخروجازبازارمی‌کند. همچنین تئوریچرخهعمر شرکتچنینفرض می‌کند کهشرکت‌هاوبنگاههای اقتصادی،همچونتمامیموجوداتزندهکهمتولد می‌شوند،رشدمی‌کنندومی‌میرند،همانندموجوداتزنده،رشدوپیریواحدهای تجاریرابرمبنایقابلیتکنترلوانعطافپذیری نشانمی‌دهند. درجوانی (دورانرشد) سازمان‌ها بسیارانعطافپذیر،ولیدربیشترمواقعغیرقابل کنترلاند.باافزایشعمرسازمان‌ها،روابطتغییر می کند،کنترلافزایشوانعطافپذیریکاهش می‌یابد.درنهایت،باپیرشدن (دورانافول)قابلیت کنترلنیزکاهشخواهدیافت. هنگامیکهواحد تجاریقابلیتکنترلداشتهوانعطافپذیرباشد، بیانگرایناستکهتوأمانمزایایجوانیوپیریرا داراست.اینوضعیتتحتعنوانمرحلهتکامل (بلوغ)شناخته می‌شود واینسیاست‌هابهگونهایدراطلاعاتحسابداری شرکت‌هامنعکسمی‌شود با توجه به موارد مطروحه فوق درپژوهشحاضر سؤالات زیر مطرح می‌شود: 1) آیا بین هموارسازی سود از طریق اقلام تعهدی اختیاری و عدم تقارن اطلاعاتی واحد تجاری در مرحله رشد رابطه وجود دارد؟ 2) آیا بین هموارسازی سود از طریق اقلام تعهدی اختیاری و عدم تقارن اطلاعاتی واحد تجاری در مرحله بلوغ رابطه وجود دارد؟ 3) آیا بین هموارسازی سود از طریق اقلام تعهدی اختیاری و عدم تقارن اطلاعاتی واحد تجاری در مرحله افول رابطه وجود دارد؟  1-3 اهمیت تحقیق مفهوم چرخه حیات، استعاره ای زیستی در مورد سازمان‌هاست. تئوریچرخهعمر شرکتچنینفرض می‌کند کهشرکت‌هاوبنگاههای اقتصادی،همچونتمامیموجوداتزندهکهمتولد می‌شوند،رشدمی‌کنندومی‌میرند،دارایمنحنی عمر یاچرخهعمرهستند. همانندموجوداتزنده،رشدوپیریواحدهای تجاریرابرمبنایقابلیتکنترلوانعطافپذیری نشانمی‌دهند. درجوانی (دورانرشد) سازمان‌ها بسیارانعطافپذیر،ولیدربیشترمواقعغیرقابل کنترلاند.باافزایشعمرسازمان‌ها،روابطتغییرمی کند،کنترلافزایشوانعطافپذیریکاهش می‌یابد.درنهایت،باپیرشدن (دورانافول)قابلیت کنترلنیزکاهشخواهدیافت. هنگامیکهواحد تجاریقابلیتکنترلداشتهوانعطافپذیرباشد، بیانگرایناستکهتوأمانمزایایجوانیوپیریرا داراست.اینوضعیتتحتعنوانمرحلهتکامل (بلوغ)شناختهمی‌شود. تئوری چرخه عمر جزء تئوری‌های طراحی سازمان می‌باشد و بیان می‌دارد: در حالی که سازمان‌ها چهار مرحله تکاملی چرخه زندگی را می‌گذرانند، از نظر ساختار،سیستم کنترل،نوآوری وهدف‌ها دست‌خوش تغییرات شدید قرار می‌گیرند. در نهایت با توجه به موارد مطروحه بالا درپژوهشحاضربه بررسی رابطه بین هموارسازی سودو عدم تقارن اطلاعاتی در مراحل چرخه عمرمی‌پردازیم.  1-4 چارچوب نظری و مدل تحقیق در تهیه صورت‌های مالی، حسابداران ناگزیر از روش‌ها و رویه های مختلف و مجاز حسابداری بهره می‌جویند که افزایش روزافزون این رویه‌ها موجب گردیده است که نتوان به راحتی صورت‌های مالی شرکت‌های مختلف را با هم مقایسه نمود. استفاده از رویه‌ها و سیاست‌های مختلف و تغییر در روش‌های مذکور، تحت اصول و موازین حسابداری توسط شرکت‌ها، گاه به یک خلاقیت و هنر می‌نماید. نقطه نظر نویسندگانی که حسابداری را به هنر نزدیک می‌دانند این است که با توجه به چگونگی تعریف اهداف، طیف گستره ای از روش‌های اندازه گیری را به کار می‌گیرند هموارسازی سود به رفتار آگاهانه ای اطلاق می‌شود که به منظور کاهش نوسان‌های دوره ای سود شکل می‌گیرد. هموارسازی سود در دهه های اخیر یکی از مهم‌ترین موضوعات مورد علاقه محققین حوزه مالی و حسابداری بوده است. در اغلب مطالعات، این عمل یک رفتار متقلبانه و غیر اخلاقی صورت گرفته توسط مدیریت تلقی گردیده است. این بررسی‌ها هم چنین فرضیات مبنی بر دخالت مدیران در هموارسازی سود را حمایت می‌نماید (فرانچسکو پودا فوینتس[1]، 2009، 7). یکی از پیامدهای تضاد منافع در شرکت‌های سهامی، گزارشگری مالی جهت دار توسط مدیران شرکت می‌باشد. مدیرانبهعنوانمسئولینتهیهصورت‌هایمالیباوقوفکاملبروضعیتمالیشرکتوبا برخورداریازسطحآگاهیبیشترنسبتبهاستفادهکنندگانصورت‌هایمالی،بهطور بالقوهسعیدارندکهتصویرواحدتجاریرامطلوبجلوهدهند. این امر از طریق اعمال نظر در سود گزارش شده واحد تجاری میسر می‌شود. به طور کلی هموارسازی سود عبارت است از اعمالنظر مدیریت شرکت در تقدم و تأخر ثبت حسابداری هزینه‌ها و درآمدها و یا به حسابگرفتن هزینه‌ها یا انتقال آن‌ها به سال‌های بعد به طوری که باعث شود شرکت در طول چندسال مالی متوالی از روند سود بدون تغییرات عمده برخوردار باشد.نتیجهکلیاینعملیاتچنینخواهدبودکه تصویرواحدتجاریبهترازوضعیتواقعیبهنظرمی‌رسدوانگیزهتزریقسرمایهومنابع مالیازطریقافرادبرونسازمانیبهشرکتافزایشمی‌یابد (الیاسیانی و جیا[2]، 2006، 55). اگر در یک معامله بالقوه یک طرف اطلاعات بیشتری نسبت به طرف دیگر داشته باشد، عدم تقارن اطلاعات وجود دارد. این مشکل شامل اطلاعات حسابداری هم می‌باشد. مدیران شرکت‌های سهامی درباره ارزش شرکت نسبت به سهامداران بیرون از شرکت اطلاعات بیشتری دارند. این امر منجر به عدم تقارن اطلاعاتی در بازار سهام می‌شود (نوروش، 1384، 93).  نمودار 1-1 مدل مفهومی تحقیق  1-5فرضیه‌های تحقیق با توجه به پرسش‌های پژوهشگر، فرضیه های زیر تبیین یافته است: بین هموارسازی سود از طریق اقلام تعهدی اختیاری و عدم تقارن اطلاعاتی واحد تجاری در مرحله رشد رابطه وجود معناداری دارد. بین هموارسازی سود از طریق اقلام تعهدی اختیاری و عدم تقارن اطلاعاتی واحد تجاری در مرحله بلوغ رابطه وجود معناداری دارد. بین هموارسازی سود از طریق اقلام تعهدی اختیاری و عدم تقارن اطلاعاتی واحد تجاری در مرحله افول رابطه وجود معناداری دارد. 1-6 اهداف تحقیق 1-6-1 اهداف علمی ارزش و اعتبار قوانین هر علم و تحقیقی به روش شناختی که در آن به کار می‌رود بستگی دارد و هدف علمی این تحقیق عبارتنداز: 1) هدف اول این تحقیق، ارزش و اعتبار بخشیدن به فرضیه تحقیق می‌باشد تا این تحقیق بتواند در بالا بردن سطح دانش عمومی مورد نیاز استفاده کنندگان موثر باشد. 2) هدف دوم این تحقیق ،زمینه ساز بستر مناسبی برای تحقیقات آتی در سایر مراکز آموزشی و پژوهشی باشد. 1-6-2 اهداف کاربردی 3)هدف سوم این تحقیق ، کاربردی بودن آن است وتحقیقاتی کاربردی اند که نظریه‌ها، قانونمندی‌ها، اصول و فنونی که در تحقیقات پایه تدوین می‌شوند را برای حل مسائل جاری و واقعی به کار می‌گیرند، این نوع تحقیقات بیشتر به مؤثرترین اقدام تأکید دارند و علّت‌ها را کمتر مورد توجه قرار می‌دهند. 1-6-2-1 کاربران مستقیم کاربران مستقیم این تحقیق عبارتند از: تحلیل گران بازار بورس، شرکت‌های سرمایه گذاری و صنعت‌گران فعال در حوزه بورس. مدیران فعال در حوزه بورس به خصوص مدیران سازمان بورس اوراق بهادار. 1-6-2-2 کاربران غیرمستقیم این پژوهش می‌تواند کاربران غیر مستقیمی به شرح زیر داشته باشد: سرمایه‌گذاران فعلی و بالقوه از جمله سرمایه‌گذاران حوزه بورس و نیز افرادی که قصد سرمایه‌گذاری در هر یک از بازارهای سرمایه یا ارز را دارند. محققان و پژوهش گرانی که حوزه تحقیقاتی آن‌ها بازار سرمایه و اقتصاد است. [1]- Francisco Poveda Fuentes [2]- Elyasiani & Jia دریافت فایل رابطه بین هموارسازی سود و عدم تقارن اطلاعاتی در چرخه زندگی شرکت های بورس اوراق بهادار تهران...